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干細胞融合是人工定向新細胞品系的重要手段，也是單克隆細胞系的關鍵技術。在保證有良好的親本細胞、穩定和良好的培養體系的條件下，細胞融合的成敗和融合率則取決于融合劑和操作技巧。細胞融合的助融劑和助融手段主要有三種；
生物學方法：用仙臺病毒或雞新城疫病毒作助融劑。
物理學方法：用電融合儀發出的脈沖電流使相鄰的兩細胞穿孔而融合。
化學方法：用聚乙二醇或血卵磷脂作助融劑。
PEG作助融劑是比較方便簡單的操作方法，具體方法如下：
一、實驗材料
1.1 眼科鑷子、剪刀數把、固定板。
1.2 37℃溫水。
1.3 酒精燈、離心管架、離心管、5-10ml吸管、1ml吸管、滴管、計數池、平皿數個。
二、實驗試劑
2.1 融合劑：50%PEG W=3000
PEG3000   1g
RPMI1640         1ml
8-10磅滅菌
2.2 基礎培養液（RPMI1640）
RPMI1640 一包 (10.4g)
L-G （L-谷氨酰胺） 0.3g
HEPES  3.0g
碳酸氫鈉 3.0g
慶大霉素 一支
三蒸水加至 1000ml
2.3 1640*培養液
基礎培養液   180ml
胎牛血清   20ml
2.4  HT培養液（終濃度H為1×10-4M，T為1.6×10-5M）
基礎培養液 197.5ml
HT濃縮液（100×） 2.5ml
胎牛血清   50ml
一次融合約配250毫升
2.5 HAT培養液（終濃度A為4×10-7M）
基礎培養液 197.5ml
HAT濃縮液（100×）  2.5ml
胎牛血清  50ml
2.6  細胞凍存液
1640*培養液    70ml
DMSO   10ml
胎牛血清   20ml
2.7 3%醋酸溶液
30%乙酸   10ml
dH2O            90ml
三、實驗步驟
3.1 脾細胞制備：取加強免疫小鼠一 只，眼眶采血后脫臼處死，在75%酒精中消毒后取脾臟，去除結締組織，制備脾細 胞懸液，轉移到50ml離心管中，加RPMI1640至30ml，1500~2000rpm離心5分鐘，棄上清，加RPMI1640至30ml，白細胞稀 釋液稀釋20倍，計數，取1×108個細胞待用。
3.2 骨髓瘤細胞制備：取3瓶生長狀態良好的（活細胞數>95%）骨髓瘤細胞，將之*吹下，轉移到50ml 離心管中，加RPMI1640至30ml，1500~2000rpm離心5分鐘，棄上清，加RPMI1640至30ml，RPMI1640稀釋10倍，計 數，取2×107個細胞待用。
3.3 細胞混合：脾細胞:骨髓瘤=5：1，混合，1500~2000rpm離心5分鐘。
注 意：由于細胞融合是個隨機過程，母細胞比例不一，會影響融合產物；或是兩種母細胞融合而成的雜交細胞，或是一種細胞自身融合產物。多數實驗者采用骨髓瘤 細胞：脾細胞＝1：5，也有人采取其他比例，如骨髓瘤細胞：脾細胞＝1：5，甚至是1：1。減少脾細胞用量目的是降低脾細胞自身融合的機率。
3.4 細胞融合：將離心上清倒干，把沉淀細胞塊彈成糊狀，置37℃水浴，
在1分鐘內加入1ml融合劑，并攪拌細胞，37℃水浴放置 45秒，
在1分鐘內加入1ml 1640并攪拌細胞終止融合劑的融合作用，500rpm離心7分鐘，棄上清。
2分鐘內加入5ml 1640并攪拌細胞
2分鐘內加入10ml 1640并攪拌細胞
2分鐘內加入10ml 1640并攪拌細胞
3.5 細胞培養：輕輕將細胞彈勻，緩緩加入HAT培養液至所需體積，將細胞重懸，輕輕地將之混勻，加到預先準備好的飼養細胞板中。 10ml吸管滴加1滴（配8ml/板），排槍滴加80~100微升（配10ml/板），37℃，CO2培養箱培養、觀察。
3.6 細胞培養、換液：細胞融合后天開始，對干細胞進行仔細觀察，記錄好細胞的生長狀態、每孔雜交細胞瘤個數、塊數、培養液有無污染、飼養細胞的狀況。培養3~5天HAT培養液換液一次，10天換HT培養液培養至20天，換1640*培養液。
Multi-class antibodies    Anti-PAK1  p21激活激酶1抗體    規格：     0.2ml
Multi-class antibodies    Anti-PAK2  p21激活激酶2抗體    規格：     0.1ml
Multi-class antibodies    Anti-PAI-1  纖溶酶原激活物抑制因子抗體    規格：     0.1ml
Multi-class antibodies    Anti-PAK4  p21激活激酶4抗體    規格：     0.2ml
Multi-class antibodies    Phospho-PAK4 (Ser474)/PAK5 (Ser602)/PAK6 (Ser560)  磷酸化p21激活激酶4、5、6抗體    規格：     0.1ml
Multi-class antibodies    Anti-Phospho-PAK4 (Ser99)  磷酸化p21激活激酶4抗體    規格：     0.1ml
Multi-class antibodies    Anti-PAI-2  纖溶酶原激活物抑制因子2抗體    規格：     0.2ml
Multi-class antibodies    Anti-phosphor-PAK1+PAK2+PAK3 (Ser141)  磷酸化p21激活激酶1/2/3抗體    規格：     0.1ml
干細胞