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人急性淋巴母細(xì)胞性白血病細(xì)胞；MOLT-4使用說(shuō)明書：
（1）準(zhǔn)備和安裝過(guò)濾器
清洗好過(guò)濾器，干燥，放入一張孔徑0.22μm的微孔濾膜，用布包裝好，15磅20 min進(jìn)行高壓滅菌處理。 在超凈臺(tái)內(nèi)打開(kāi)過(guò)濾器架好，膠管一端接入濾泵再插入待除菌的液體中，出口端膠管深入到已消毒好的瓶子中。用泵過(guò)濾，過(guò)濾后要檢查濾膜是否完好無(wú)損。 

(二)小牛血清的處理 
市場(chǎng)上出售的小牛血清一般做了滅菌處理，但在使用前還應(yīng)做熱滅活處理，即通過(guò)加熱的方法破壞補(bǔ)體(近來(lái)也有觀點(diǎn)認(rèn)為熱滅活處理是不必要的)。胎牛血清不必滅活。

1、 將血清加熱至56℃并保持30 min，其間要不時(shí)輕輕晃動(dòng)，使受熱均勻，防止沉淀析出。

2、 處理后的血清貯存于4℃。

3、 小牛血清在使用前進(jìn)行篩選以掌握血清的質(zhì)量。 

(三)生長(zhǎng)培養(yǎng)基的配制 

除無(wú)血清培養(yǎng)之外，各種合成培養(yǎng)基在使用前需加入一定量的小牛血清或胎牛血清和抗菌素。
培養(yǎng)基分裝成小瓶(100～200 mL)以便使用，翻帽塞塞緊瓶口。
按如下比例配制： 基本培養(yǎng)基占80％~90％，小牛血清或胎牛血清占10％~20％。 按1％體積分?jǐn)?shù)加入雙抗貯存液(青霉素+鏈霉素)，使青霉素和鏈霉素的終濃度分別為100 U／mL和100 μ／mL，。
(四)凍存細(xì)胞的復(fù)蘇
應(yīng)遵守慢凍快融的原則。先將水浴鍋調(diào)至37-37。5度，取出凍存的細(xì)胞迅速放入后將細(xì)胞面浸至水面以下不斷搖動(dòng)至融化。
在無(wú)菌臺(tái)內(nèi)將*培養(yǎng)基加入50ml的小培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，約5ml左右，然后用無(wú)菌吸管從凍存管內(nèi)取出細(xì)胞，置培養(yǎng)并內(nèi)輕輕搖晃，使細(xì)胞均勻后置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。
(五)傳代:
貼壁細(xì)胞:
對(duì)于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強(qiáng)度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進(jìn)行消化，(根據(jù)經(jīng)驗(yàn))，晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見(jiàn)細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮，然后分置其它無(wú)菌培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
懸浮細(xì)胞:
一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

(六)凍存 

將人急性淋巴母細(xì)胞性白血病細(xì)胞；MOLT-4消化后離心收集，懸浮細(xì)胞直接離心收集，以*培養(yǎng)基或胎牛血清重懸細(xì)胞至終濃度約106/ml。加入10%的DMSO。以每管1～2ml分裝至凍存管中。用絕熱材料包裹置-70攝氏度冰箱冷凍過(guò)夜。次日保存到液氮中。 

(七)注意事項(xiàng)
1.玻璃吸管和玻璃培養(yǎng)瓶的消毒:1)高壓蒸汽滅菌15分鐘以上;2)干烤消毒140度2小時(shí)以上;

2.無(wú)菌工作臺(tái)先清洗后用75%酒精擦拭干凈，紫外線照射40分鐘以上;各種培養(yǎng)板照射3小時(shí)以上;

3.培養(yǎng)基(pH7.2)和血清配制好后要做無(wú)菌試驗(yàn):將血清按10%加入培養(yǎng)基內(nèi)，用無(wú)菌的玻璃離心管或玻璃瓶取*培養(yǎng)基5-10ml置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)2-3天，肉眼見(jiàn)無(wú)渾濁或沉淀等異物。分裝后置4度保存;

4.消化液(pH7.8)或其它加入液，應(yīng)用高壓蒸汽滅菌或一次性無(wú)菌濾器過(guò)濾除菌，分裝成支置-20度保存;

5.培養(yǎng)箱應(yīng)先用清水清洗后用75%酒精擦拭一遍(如有紫外線的應(yīng)照射1小時(shí)以上，如有高溫滅菌的應(yīng)按程序來(lái)菌)。至少每月一次。

6.進(jìn)入操作時(shí)應(yīng)注意先清洗雙手及手腕，然后用75%酒精擦拭，操作時(shí)注意無(wú)菌臺(tái)內(nèi)空間層次。手及物品不要在暴露的瓶口上方來(lái)往，如果數(shù)量較多，培養(yǎng)瓶應(yīng)放在與酒精燈平行地方便于操作，瓶與瓶之間應(yīng)相隔一定的距離，開(kāi)瓶(蓋)時(shí)應(yīng)先用75%酒精反復(fù)擦拭或用燈燒，打開(kāi)后應(yīng)用燈先燒口，然后燒蓋。用完后同樣操作。整個(gè)操作過(guò)程盡量在無(wú)菌臺(tái)靠里面一點(diǎn)。
134-03-2     200mg    Sodium Ascorbate     抗壞血酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品
134-05-4     25mg    10-Formylfolic Acid     10-甲酰葉酸標(biāo)準(zhǔn)品
13412-64-1    500mg    Dicloxacillin Sodium    雙氯西林鈉標(biāo)準(zhǔn)品
134308-13-7     200mg    Tolcapone     托卡朋標(biāo)準(zhǔn)品
13446-34-9     1g    Manganese Chloride (AS)    氯化錳標(biāo)準(zhǔn)品
134566-79-3    15mg        乙胺丁醇相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品
134612-80-9     25mg    Tolcapone Related Compound B    托卡朋相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品
134-62-3    3g    Diethyltoluamide    避蚊胺標(biāo)準(zhǔn)品
人急性淋巴母細(xì)胞性白血病細(xì)胞；MOLT-4