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人胚胎心肌組織來源細胞實驗原理

閱讀:356          發布時間:2017-8-15
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人胚胎心肌組織來源細胞實驗原理:
1收到細胞后當天換液,全部更換成客戶自己的新鮮培養基,放進培養箱,第二天再消化。
2邊觀察邊消化,CCC-HHM-2人胚胎心肌組織來源細胞根據細胞的形態,終止消化時間,采取以半分鐘間隔吹打細胞邊緣,如可吹打下來,即終止消化。客戶摸索比較好的消化時間。
3隨細胞有一份細胞操作說明書,請客戶仔細查看。
4記得加1%雙抗,降低被污染的概率。另外盡早凍存留種,以備后用。
5售后時間為一周,于細胞本身的質量問題,而因乙方自己不當操作(不規范操作,消化過度,不加雙抗導致的污染等)導致的細胞問題不在售后范疇。
6收到細胞后,如細胞狀態不佳,或培養中遇到問題,煩請當天盡快,以便處理。當天及時反饋細胞情況和細胞照片是售后跟蹤處理重要的參考依據,請您務必重視。
7剛收到細胞時,胎牛血清可以用15%培養兩三天,利于細胞盡快恢復狀態,細胞狀態穩定后,再調回10%即可。
IDMEM:適合細胞密度低,生長困難的細胞。如雜交細胞的篩選,DNA轉染后轉化細胞的篩選培養。
RPM1640:應用zui廣泛的培養基之一。懸浮細胞培養,主要針對淋巴細胞,也適合其他細胞。
199、109培養基:成分齊全,培養效果較好。
F10培養基:適合小鼠及人類二倍體細胞培養。
F12培養基:CCC-HHM-2人胚胎心肌組織來源細胞適合單細胞分離培養及無血清培養。
McCoy’s培養基:特別適合原代細胞及較難培養細胞的生長。
人胚胎心肌組織來源細胞培養條件:    詳見細胞說明書
        【傳代方法】    建議1:2-1:3 兩天換液一次
        【凍存條件】    詳見細胞說明書
        【主要文獻】    請具體查閱相關發表文章
實驗室細胞培養經驗分享:
啟蒙老師的重要性:一般進實驗室都有師兄師姐帶著做,他們就是你做細胞的啟蒙老師。他們的操作手法、細節、理論講解就成了你操作的準則,如營養液、細胞瓶的擺放位置;滅菌處理程序;開蓋手法;細胞吹打手法等等。要學會他們的正確操作,在*次的時候就要重視。
像養孩子一樣養細胞:細胞真的很脆弱,每天都去看看它,以防止出現培養箱缺水、缺二氧化碳、停電、溫度不夠等異常現象,也好及時解決這些意外,避免重復實驗帶來的更大痛苦。
好細胞要及時保種:細胞要分批傳代,這樣即使有一批出了問題,還有一批備用的。像后者一般人可能不容易做到。但這是我血的教訓,有一次細胞污染了,全軍覆沒。當時可后悔沒有保種。
每種細胞都有自己的特性,要區別對待:細胞跟人一樣,不同的細胞,培養特性是不一樣的。培養過程中要細細體會。不同細胞株使用不同的培養基和血清。
如我養的平滑肌細胞很活躍,喜歡熱鬧,2~3天就好多人口,而且不太愛吃喝,真是養的孩子了。內皮細胞和平滑肌細胞性格相近,不過它很不講衛生,也很邋遢,里面有很多分泌屋,要經常換洗才行。RAW264.7細胞也很開朗,而且很能吃,要經常喂它,頭疼的是細胞很容易活化,培養它的瓶子和環境沒有內毒素才好。
玻璃器皿的清洗。對于玻璃器皿(細胞瓶、裝營養液的瓶子、小青霉素瓶等)要先用洗衣粉刷干凈(注意死角),然后沖干凈。用酸液浸泡 24 h 以上,CCC-HHM-2人胚胎心肌組織來源細胞之后用清水沖洗 10 遍,除去殘留酸液。瓶子之類,沖洗過程要使勁搖晃。然后在雙蒸水浸泡24h。晾干后包扎,160℃干烤2h待用。
試劑配置。細胞培養用的液體一般使用雙蒸以上的水即可。并注意pH值的調節。
無菌檢驗。主要采用過濾除菌:如胰酶、抗生素、G-418溶液、各類培養基、丙酮酸鈉、谷氨酰胺等。有些可以采用高壓滅菌:如PBS、D-Hank's等。
人胚胎心肌組織來源細胞試劑分裝保存:包括營養液、胰酶、血清等。

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