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小鼠骨髓細胞染色體標本制備實驗步驟

閱讀:1187          發布時間:2017-4-18
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預處理→取股骨→沖洗骨髓→離心→低滲→離心→固定→離心→滴片→染色→觀察 

1.預處理:實驗前2.5-3小時,按每克體重注射0.02ml,給小白鼠腹腔注射秋水仙素。 
2.取股骨:斷頸處死小鼠后,剔去肌肉組織,洗凈
3.沖洗骨髓:剪去兩端的股骨頭,吸取 10ml 2%檸檬酸鈉,注射 器針頭插入股骨一端,反復沖洗兩根股骨,洗液收集到10ml的離心管中
4 .離心: 1000r/min 離心10 min ,棄上清
5 .低滲:加入8ml 0.075mol/LKCl溶液,滴管吹散,37℃水浴低滲30 min ,中間(約15 min )再吹散一次,使細胞分散,懸浮于溶液中 
6.離心:1000r/min離心10 min,棄上清
7.固定:沉淀加8ml固定液,并用吸管輕 輕吹勻,進行固定,中間(約15 min )再吹散一次
8. 離心: 1000r/min 離心10 min ,留1 ml 左右上清,輕輕吹打成細胞懸液
9. 滴片:用吸管吸取細胞懸液,高度30-40 cm,滴在預冷的載玻片上,在酒精燈火焰上微微加熱,室溫晾干 
10. 染色:改良石炭酸品紅染色10-20 min
11. 觀察:低倍———高倍 

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