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技術(shù)文章

轉(zhuǎn)化細(xì)胞實(shí)驗(yàn)選擇的重要依據(jù)

閱讀:288          發(fā)布時(shí)間:2018-7-31

一、原理:體外培養(yǎng)轉(zhuǎn)化細(xì)胞生長(zhǎng)、分裂繁殖的能力,可用分裂指數(shù)來表示。它與生長(zhǎng)曲線有一定的聯(lián)系,如隨著分裂指數(shù)的不斷提高,細(xì)胞也就進(jìn)入了指數(shù)生長(zhǎng)期。分裂指數(shù)指細(xì)胞群體中分裂細(xì)胞所占的百分比,它是測(cè)定細(xì)胞周期的一個(gè)重要指標(biāo),也是不同實(shí)驗(yàn)研究選擇細(xì)胞的重要依據(jù)。

二、儀器、用品與試劑

1、儀器與用品:CO2培養(yǎng)箱、普通顯微鏡、細(xì)胞培養(yǎng)血、蓋玻片、吸管

2、試劑:培養(yǎng)液、胰酶、甲醇、冰醋酸、Giemsa染液

三、操作步驟

1、消化細(xì)胞,將細(xì)胞懸液接至內(nèi)含蓋玻片的培養(yǎng)皿中。

2、CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí),使細(xì)胞長(zhǎng)在蓋片上。

3、取出蓋片,按下列順序操作:

PBS漂洗3分鐘→甲醇:冰醋酸=3:1固定液中固定30分鐘→Giemsa液染色10分鐘→自來水沖洗。

4、蓋片晾干后反扣在載玻片上,鏡檢。

5、計(jì)算:

分裂指數(shù)=分裂細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)×100%

四、注意事項(xiàng);操作時(shí)動(dòng)作要輕,以免使蓋片上的轉(zhuǎn)化細(xì)胞脫落。

 Phospho-Stat4 (Tyr693) 丙型肝炎病毒核結(jié)合蛋白-1抗體

 phospho-STAT(Tyr694) 丙型肝炎病毒-NS4a抗體

 phospho-STAT6(Tyr641) 丙型肝炎病毒-NS3抗體

 Phospho-Stathmin (Ser16) 丙型肝炎病毒-NS1抗體

 Phospho-Stathmin (Ser38) 丙型肝炎病毒-C區(qū)抗體

 phospho-STMN2/SCG10 (Ser50) 丙酮酸脫氫酶激酶亞型2抗體

 Phospho-Syk (Tyr323) 丙酮酸脫氫酶激酶4抗體

 Phospho-Syk (Tyr525/526) 丙酮酸脫氫酶激酶1

 phospho-Synapsin I (Ser553) 丙酮酸脫氫酶復(fù)合物X蛋白抗體

 phospho-Synapsin I (Ser9) 丙酮酸脫氫酶α1抗體

 phospho-Syndecan 4(Ser179) 丙酮酸脫氫酶E1β亞單位抗體
轉(zhuǎn)化細(xì)胞

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