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1.有一些干細(xì)胞可以不用消化液就能夠吹打下來。個(gè)人認(rèn)為能不用消化液是的。譬如巨噬細(xì)胞。我一直維持巨噬細(xì)胞，每次傳代都不用消化液，吹打的時(shí)候我一般會(huì)用瓶內(nèi)未換的剩余舊培養(yǎng)液，這樣子比用新的培養(yǎng)基可以減少點(diǎn)泡沫的生成。當(dāng)然這個(gè)一定要求原培養(yǎng)基未被污染。
2. 吹打的時(shí)候我們都知道要一點(diǎn)挨著一點(diǎn)吹，這樣子不會(huì)漏掉地方。而我每次都會(huì)首先沿著兩條對(duì)角線的方向吹打，然后再按照橫著或者是豎著吹打。這樣子就可以比較容易把細(xì)胞吹下來，因?yàn)槭紫燃?xì)胞的各個(gè)方向都受力了，而且比較均勻，細(xì)胞比較容易下來，而且對(duì)細(xì)胞形態(tài)的維護(hù)比較好。
3.對(duì)膠頭滴管的要求。膠頭滴管頭部是做成彎曲45度角的形狀，一般都是自己用止血鉗夾住頭部在酒精燈上燒彎。我還發(fā)現(xiàn)，如果你吹打的時(shí)候，滴管的頭部邊緣如果是和吹打平面平行的話，反而容易產(chǎn)生泡沫，貼在底部吹，也容易產(chǎn)生泡沫，是能夠有一個(gè)角度順著你吹打的方向和滴管一致。并且稍微遠(yuǎn)離吹打面，這樣滴管內(nèi)的液體容易流出，阻力會(huì)減小，就不會(huì)產(chǎn)生那么多的泡沫了。
4.控制你吹打的節(jié)奏，急速地吹打會(huì)很快地產(chǎn)生泡沫，用力越大，越容易產(chǎn)生。是能夠把握住自己的力度和節(jié)奏，有條不紊的吹打。我的體會(huì)是以自己拿滴管用手的輕松程度為準(zhǔn)，如果剛吹幾下很快就累的話，那就證明干細(xì)胞是節(jié)奏過快。吹完都不累的話那就是太慢力度也不夠。我覺得一般在吹完一遍時(shí)指頭發(fā)困會(huì)比較好。這樣的節(jié)奏能夠比較快速而且有效地完成。
本人覺得zui關(guān)鍵的操作是不要吹打到底。
培養(yǎng)細(xì)胞多年，避免氣泡產(chǎn)生要注意以下兩點(diǎn)：
1 吹打用的培養(yǎng)基不能太少，如果只有1-2mL，氣泡難以避免；
2 吸管每次打出液體后立刻深入液面下吸取液體。
在傳代的時(shí)候，急速的反復(fù)吹打肯定容易產(chǎn)生泡沫，這對(duì)細(xì)胞不利，所以我們要盡量避免。在操作時(shí)盡量選用較大口的吸管，吸液時(shí)先將吸管內(nèi)空氣排空，再深入液面以下吸液，吹打干細(xì)胞時(shí)，盡量沿著壁吹出液體，操作輕柔，就可zui大程度避免泡沫的產(chǎn)生！