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干細胞培養器皿的清洗方法
閱讀:839 發布時間:2017-6-27干細胞離體條件下,有害物質可直接與細胞接觸,細胞對任何有害甚至有益的物質十分敏感,極少量殘留物就會對細胞產生毒性作用。因此,新的或重新使用的器皿都必須認真清洗,使其達到不含任何殘留物的要求。因不同培養器皿的材料、結構、使用方法不同,清洗的方法也有區別.現分別介紹如下。
1.玻璃器皿的清洗,玻璃器皿的清洗一般要經過浸泡、刷洗、浸酸和清洗四個步驟。
(1)浸泡:新的或用過的玻璃器皿都需先用清水浸泡,以軟化和溶解附著物。新的玻璃器皿使用前得先用自來水簡單刷洗,然后用5%鹽酸浸泡過夜;用過的玻璃器皿往往附有大量蛋白質和油脂,干涸后不易刷洗掉,故用后應立即浸入清水中以備刷洗。
(2)刷洗:將浸泡后的玻璃器皿放到洗滌劑(不能用含沙粒的洗衣粉)水溶液中,用軟毛刷反復刷洗。刷洗中,要不留死角,并防止破壞器皿表面的光潔度。將刷洗干凈的玻璃器皿洗凈、晾干,備浸酸。
(3)浸酸:浸酸是將上述玻璃器皿浸泡到清潔液,又稱洗液或酸液(表2一5)中,通過清潔液的強氧化作用清除器皿表面可能殘留的物質。干細胞根據清潔液含硫酸比例,將清潔液分為強酸、次強酸和弱酸三種。根據需要配制和選用不同的清潔液。清潔液對玻璃無腐蝕作用,去污效果很好,是保證器皿潔凈的關鍵一環。一般來說,新的或用過的玻璃器皿都應浸酸,那些無法用毛刷刷洗的用品(如吸管、滴管等)更要靠浸酸去除污物。浸酸時,器皿應*被清潔液充滿和覆蓋。浸酸時間不能少于6h,一般要過夜或更長時間。將器皿放人清潔液時.應小心操作.防止傷及皮膚、眼睛或衣服。從清潔液中取出器皿時,應瀝干清潔液,并將浸酸的器皿放入合適容器,如塑料盆中運輸。
配制清潔液時,操作者必須小心認真,戴耐酸手套和防護眼鏡,并嚴格按下列方法進行:按配方稱量好重鉻酸鉀和蒸餾水,然后將重鉻酸鉀*溶于蒸餾水中。按配方把工業用濃硫酸緩慢(以產熱很少為宜)加入重鉻酸鉀溶液中,邊加邊攪拌。自然冷卻、備用。
新配制的清潔液呈棕紅色。當使用時間過久,清潔液的顏色變暗、發綠或混濁時,應棄去(深埋地下).配制新的。配制、盛裝清潔液的容器應防酸、耐熱、有較大的開口,一般用瓷缸、玻璃制品或耐酸塑料制品。
(4)沖洗:刷洗和浸酸后的器皿都必須用水充分沖洗,浸酸后器皿是否沖洗得干凈,直接影響到干細胞培養的成敗。沖洗可用洗滌裝置,也可用手工操作。手工洗滌浸酸后的器皿時.每件器皿都至少要重復“注滿水一倒空”15次以上,zui后用重蒸水浸洗2~3次,晾干或烘干后包裝備用。