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技術文章

細胞內堿性蛋白和酸性蛋白的顯示原理和方法

閱讀:18955          發布時間:2017-3-14

原理

轉化細胞由于不同的蛋白質分子所帶的堿性和酸性基團的數目不同,在pH值不同的溶液中,蛋白質分子所帶的凈電荷多少不同。如在生理條件下,整個蛋白質所帶負電荷多,則為酸性蛋白質;帶正電荷多,則為堿性蛋白質。據此,可將標本經三氯醋酸處理提出核酸后,用不同pH值的固綠染液分別染色,細胞內的酸性蛋白和堿性蛋白質顯示出來。

轉化細胞方法

1.以破壞脊髓法處死蟾蜍,將其腹面向上放人蠟盤中,剪開胸腔,打開心包。小心將心臟剪一小口,取心臟血一滴滴在干凈載玻片一端,推片,按此法制備二張血涂片,室溫晾干。

2. 將涂片作好標記放在70%乙醇中固定5分鐘,室溫晾干。

3.放入5%三氯醋酸中60℃30分鐘,抽提出核酸。

4.清水沖洗多次(3分鐘以上),以沖去痕跡的三氯醋酸。

5.濾紙吸干玻片上水分。

6. 一張片放入0.1%堿性固綠(pH8.0~8.5)中染色10~15分鐘,另一張片放入0.1%酸性固綠(pH2.0~2.5)染色5~10分鐘。

7.清水沖洗,蓋上蓋片鏡檢。

轉化細胞結果經堿性固綠染色片中,胞質、核仁不著色,細胞核大部分被染成綠色,是為堿性蛋白質存在處。經酸性固綠染色片中,因胞質和核仁中有酸性蛋白,被染成綠色。 

 

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