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當(dāng)前位置：北京百奧創(chuàng)新科技有限公司>>代理>> PRS-ICM-2DPRECEDO原代腸癌培養(yǎng)基
產(chǎn)品名稱：PRECEDO原代腸癌培養(yǎng)基（Human intestine Carcinoma Cell Medium）
產(chǎn)品說明：PRECEDO原代腸癌培養(yǎng)基（Human intestine Carcinoma Cell Medium）是一種為促進(jìn)人源腸癌原代細(xì)胞體外生長而開發(fā)的培養(yǎng)基。它是一種無菌的液體混合系統(tǒng)，含有必需和非必需的氨基酸、維生素、有機(jī)和無機(jī)化合物、激素、生長因子、微量礦物質(zhì)等。培養(yǎng)基基于碳酸氯鹽的緩沖體系，在5%CO2、37℃培養(yǎng)箱中平衡時(shí)，pH值為7.4。該培養(yǎng)基的配方可以提供一個(gè)理想人源腸癌原代細(xì)胞體外培養(yǎng)環(huán)境，選擇性地促進(jìn)體外人源腸癌原代細(xì)胞的生長。
產(chǎn)品優(yōu)勢：
(1) 培養(yǎng)成功率高
(2) 體外持續(xù)擴(kuò)增
(3) 保持腫瘤原始病理特征
(4) 藥敏結(jié)果宇臨床數(shù)據(jù)接近
使用說明：
?使用前準(zhǔn)備
（1）預(yù)冷的DMEM/F12培養(yǎng)基稀釋基質(zhì)膠（Corning#356231）（50倍稀釋，現(xiàn)配現(xiàn)用），并取適量*覆蓋培養(yǎng)容器，在5%CO2 37℃包被培養(yǎng)容器底部0.5~3h，使用時(shí)棄上清。
（2）15mL無菌離心管、移液器、移液管、無菌槍頭等表面75%酒精消毒后放入生物安全柜中紫外照射30 min;提前30min從4 ℃冰箱取出*培養(yǎng)基平衡至室溫。
?腸癌原代細(xì)胞培養(yǎng)
（1）至少提前半小時(shí)使用稀釋后的基質(zhì)膠預(yù)鋪培養(yǎng)瓶/板，使用前吸棄基質(zhì)膠，用稀釋液潤洗一遍。
（2）將分離并計(jì)數(shù)后的細(xì)胞懸液參考表1中細(xì)胞數(shù)量接種于培養(yǎng)瓶/板，補(bǔ)加*培養(yǎng)基至所需體積，輕輕搖晃混勻，75%酒精表面消毒后放置培養(yǎng)箱，37℃、5%CO2培養(yǎng)。
（3）原代細(xì)胞初次接種后2-3天內(nèi)勿動(dòng)（利于細(xì)胞貼壁），第一次換液建議換半液。
?腸癌原代細(xì)胞傳代
（1）鏡下觀察細(xì)胞形成克隆，且匯合度85~95%時(shí)即可傳代。
（2）培養(yǎng)箱中取出細(xì)胞，棄舊培養(yǎng)液，0.05%yi-mei洗滌5秒后吸盡，再加入適量0.05%yi-mei，37℃孵育，2~5 min后拿出輕拍培養(yǎng)瓶/板側(cè)面，顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況。
（3）細(xì)胞消化至細(xì)胞變圓并開始脫落時(shí)用原代細(xì)胞終止培養(yǎng)基終止消化，并將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至離心管中，1500 rpm, 3min。
（4）棄上清，以1~5mL條件培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，活細(xì)胞計(jì)數(shù)，將細(xì)胞懸液按適合的細(xì)胞密度接種于培養(yǎng)瓶/板，（不同規(guī)格培養(yǎng)瓶/板底面積、接種原代細(xì)胞數(shù)量、添加滋養(yǎng)細(xì)胞數(shù)量如表1所示），補(bǔ)加培養(yǎng)基至所需體積，十字交叉混勻，培養(yǎng)容器75%表面消毒后置37℃、5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。其他步驟同上。
注意事項(xiàng)：
（1）本產(chǎn)品在使用前需平衡至室溫。
（2）使用產(chǎn)品時(shí)應(yīng)注意無菌操作，避免污染。
（3）本產(chǎn)品中不含血清，含有原代細(xì)胞專用抗生素，如無特別需要不用額外再添加血清和雙抗，可直接使用。
（4）樣本需為腫瘤組織，且腫瘤細(xì)胞比例越高（>50%），培養(yǎng)成功率越高。
（5）為保持本產(chǎn)品的理想使用效果，不宜將其過夜放置于室溫或較高的溫度環(huán)境中。
（6）請于保質(zhì)期內(nèi)使用本產(chǎn)品，超出保質(zhì)期，必須放棄使用。
（7）傳代消化時(shí)切記不要消化過度，不宜超過5min，對細(xì)胞造成損傷，影響細(xì)胞狀態(tài)。
（8）本產(chǎn)品僅用于科研用途，不能用于體外診斷。
