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常見的RNA提取方法
一、酚氯仿抽提(有機試劑抽提)
原理:將被裂解的生物樣本,混勻離心分相以后,RNA在上層水相,DNA,蛋白質在中間層,下層有機相。收集水相加入乙醇或異丙醇可沉淀RNA,漂洗后得到RNA。
優點:得率高、可提取到含miRNA和其他小RNA在內的總RNA。
缺點:用到苯酚、氯仿等有毒試劑。
二、硅膠柱法抽提
原理:硅基質材料在一定的高鹽緩沖系統下高效、專一地吸附核酸。(高鹽低pH吸附核酸,低鹽高pH釋放核酸。
優點:操作簡單、安全無毒
缺點:需配合高速離心機使用;提取的總RNA不含小于200nt的小RNA。
三、磁珠法抽提
原理:納米微球磁珠材料表面涂上一層二氧化硅,使磁珠獲得吸附能力。
優點:磁場中快速分離,無需離心,可實現自動化操作。
缺點:成本較高;提取的RNA可能殘存磁珠。
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