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詳細介紹
本公司所有產品僅供科學實驗，不做其他科學實驗外的使用！
商品屬性：
貨號 | GOY-SH120 | 檢測方法 | 微量法 |
規格 | 100管/96樣 | 產品類別 | 輔酶Ⅰ系列 |
測定意義：
MDH （EC 1.1.1.37）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，線粒體中MDH是TCA循環的關鍵酶之一，催化蘋果酸形成草酰乙酸；相反，胞漿中MDH催化草酰乙酸形成蘋果酸。草酰乙酸是重要的中間產物， 連接多條重要的代謝途徑。因此，MDH在細胞多種生理活動中扮演著重要的角色，包括線粒體的能量代謝、 蘋果酸-天冬氨酸穿梭系統、活性氧代謝和抗病性等。根據不同的輔酶特異性，MDH分為NAD-依賴的MDH和NADP-依賴的MDH， NADP-MDH主要存在于真核細胞中。
測定原理：
NADP-MDH催化NADPH還原草酰乙酸生成蘋果酸，導致340nm處光吸收下降。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
試劑一、提取液 100 mL×1 瓶，在 4℃保存；
試劑二、液體 20 mL×1 瓶，在 4℃保存；
試劑三、粉劑×1 瓶，-20℃保存；
樣本測定的準備：
1、細菌、細胞或組織樣品的制備：
細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量
（104個）：試劑一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 試劑一），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，
加入 1mL 試劑一），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟:
1、 分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上，調節波長至 340nm，蒸餾水調零。
2、檢測工作液的配制：用時在試劑三中加入 19mL 試劑二和 0.5mL 蒸餾水，充分混勻待用；
用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融；
3、測定前將檢測工作液在 37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）水浴 10min 以上。
4、在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 5μL 樣本和 195μL 工作液，混勻后立即記錄 340nm
處 20s 時的吸光值 A1 和 1min20s 后的吸光值 A2，計算 ΔA=A1-A2。
注意：若 A1-A2 大于 0.5，需將酶液用提取液稀釋，使 A1-A2 小于 0.5，可提高檢測靈敏度。
計算公式中乘以相應稀釋倍數。
NADP-MDH 活力單位的計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、血清（漿）NADP-MDH 活力的計算
單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘消耗 1 nmol 的 NADPH 定義為一個酶活力單位。
NADP-MDH（nmol/min/mL）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷V 樣÷T=6430×ΔA
2、組織、細菌或細胞中 NADP-MDH 活力的計算:
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADPH 定義為一個酶活力單位。
NADP-MDH（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADPH 定義為一個酶活力單位。
NADP-MDH（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷（W ×V 樣÷V 樣總）÷T=6430×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADPH 定義為一個酶活力單位。
NADP-MDH（nmol/min/104cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（V樣÷V樣總×500）÷T=12.86×ΔA
V 反總：反應體系總體積，2×10-4L；ε：NADPH 摩爾消光系數，6.22×103L / mol /cm；d：
比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.005 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：
反應時間，1 min；W：樣本質量，g；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；500：細胞或細菌總數，500 萬。
b.用 96 孔板測定的計算公式如下
1、血清（漿）NADP-MDH 活力的計算
單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘消耗 1 nmol 的 NADPH 定義為一個酶活力單位。
NADP-MDH（nmol/min/mL）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷V 樣÷T=12860×ΔA
2、組織、細菌或細胞中 NADP-MDH 活力的計算:
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADPH 定義為一個酶活力單位。
NADP-MDH（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=12860×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADPH 定義為一個酶活力單位。
NADP-MDH（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷（W× V 樣÷V 樣總）÷T=12860×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADPH 定義為一個酶活力單位。
NADP-MDH（nmol/min/104cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（500×V樣÷V樣總）÷T=25.72×ΔA
V 反總：反應體系總體積，2×10-4L；ε：NADPH 摩爾消光系數，6.22×103L / mol /cm；d：96 孔板光徑，0.5cm；V 樣：加入樣本體積，0.005 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；
T：反應時間，1 min；W：樣本質量，g；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；500：細胞或細
菌總數，500 萬。
生化試劑盒的使用注意事項：
選擇合適的試劑盒：根據實驗目的和檢測對象選擇合適的試劑盒，確保實驗的準確性和可靠性。
嚴格遵循說明書：按照試劑盒的說明書進行操作，避免誤用或浪費。
注意保存條件：按照試劑盒的保存條件進行妥善保存，避免陽光直射、高溫或潮濕等不利因素。
控制實驗條件：在實驗過程中嚴格控制實驗條件，如溫度、時間、pH值等，以確保實驗結果的穩定性。
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