詳細(xì)介紹
反應(yīng)五要素:
傳染性胸膜肺炎(APP)核酸檢測(cè)試劑盒圖片參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
使用及效果:
將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子(約1/4 黃豆大?。┗蛑睆郊s為0.5-0.7 cm(或面積相當(dāng)?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保溫10-15 分鐘,加入0.1 mL 溶液B,混勻,直接取上清液(相當(dāng)于PCR 體積的1/10)作為模板進(jìn)行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 分類 |
傳染性胸膜肺炎(APP)核酸檢測(cè)試劑盒圖片 | 48T | PCR檢測(cè)試劑盒 |
樣本采集、存放及運(yùn)輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過(guò)72h,-70℃以下可長(zhǎng)期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(zui多凍融3次);
3、運(yùn)輸:采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
普通PCR反應(yīng)流程:
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自備物品:
傳染性胸膜肺炎(APP)核酸檢測(cè)試劑盒圖片15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標(biāo)儀:用于微量樣品比色分析
儲(chǔ)存條件:
14℃或-20℃
準(zhǔn)備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書 1份
甲酰分子式:136.15分子量: C7H8N2O英文名稱:Phenyl hydrazineCAS號(hào):613-94-5
(乙環(huán)戊二)(三膦)銅分子式:418.99分子量: C25H24CuP英文名稱:(乙環(huán)戊二)(三膦)銅CAS號(hào):308847-89-4
2-羥澤蘭內(nèi)酯英文名稱:2- hydroxy eupatolideCAS號(hào):分子式:248.31分子量:C15H20O3
1-溴-2-氟-4-三氟甲氧分子式:259分子量: C7H3BrF4O英文名稱:1- bromine -2- three -4-CAS號(hào):168971-68-4
性絡(luò)深綠G英文名稱:Acid chrome dark green GCAS號(hào):分子式:分子量:
1-萘甲英文名稱:1- naphthaleneCAS號(hào):118-31-0分子式:157.22分子量: C11H11N
2-硝-4-三氟甲氟分子式:209.1分子量: C7H3F4NO2英文名稱:2- nitro -4- three fluorine fluorotolueneCAS號(hào):367-86-2
克羅米通英文名稱:CrotamitonCAS號(hào):483-63-6分子式:203.28分子量: C13H17NO
二氫石蒜堿英文名稱:Two Shi SuanjianCAS號(hào):6271-21-2分子式:289.32636分子量:C16H19NO4
4-羥-8-甲氧-2-甲喹啉分子式:189.21分子量: C11H11NO2英文名稱:4- hydroxy -8- methyl group -2-CAS號(hào):15644-89-0
3--2-氟吡分子式:112.11分子量: C5H5FN2英文名稱:3- amino -2-CAS號(hào):1597-33-7
Shiga-like toxin IIe variant subunit A 大腸桿菌志賀樣毒素Ⅱ型突變體(O139菌型)抗體 0.2ml
Oct-1 胚胎干細(xì)胞關(guān)鍵蛋白1抗體 0.1ml
phospho-CD19(Ser227) 磷酸化CD19抗體 0.1ml
Chloroplast protease 葉綠體蛋白酶抗體(植物) 1ml
Goat Anti-rat IgG/PE PE標(biāo)記的羊抗大鼠IgG 0.1ml
phospho-gp130(Ser 782) 磷酸化gp130抗體 0.2ml
PEA15 星形膠質(zhì)細(xì)胞PEA15抗體 0.2ml
phospho-P70 S6 Kinase beta (Thr228) 磷酸化核糖體S6蛋白激酶抗體 0.1ml
DECR1 線粒體2,4-雙烯酰輔酶A還原酶1抗體 0.1ml
ABHD15 水解酶結(jié)構(gòu)域蛋白15抗體 0.2ml
Cecropin monoclonal 殺菌肽/天蠶抗菌肽單克隆抗體 1ml
ITIH1 衍生透明質(zhì)酸相關(guān)蛋白抗體 0.2ml