詳細(xì)介紹
反應(yīng)五要素:
豬乙型腦炎病毒(JEV)核酸檢測試劑盒圖片參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。
使用及效果:
將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子(約1/4 黃豆大小)或直徑約為0.5-0.7 cm(或面積相當(dāng)?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保溫10-15 分鐘,加入0.1 mL 溶液B,混勻,直接取上清液(相當(dāng)于PCR 體積的1/10)作為模板進(jìn)行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 分類 |
豬乙型腦炎病毒(JEV)核酸檢測試劑盒圖片 | 48T | PCR檢測試劑盒 |
樣本采集、存放及運(yùn)輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(zui多凍融3次);
3、運(yùn)輸:采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
普通PCR反應(yīng)流程:
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自備物品:
豬乙型腦炎病毒(JEV)核酸檢測試劑盒圖片15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標(biāo)儀:用于微量樣品比色分析
儲存條件:
14℃或-20℃
準(zhǔn)備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
草氨酸鉀分子式:127.14分子量: C2H2KNO3英文名稱:Potassium potassiumCAS號:21141-31-1
四硼酸鉀分子式:305.5分子量: K2B4O7·4H2O英文名稱:Four boric acidCAS號:12045-78-2
4-芐吡分子式:169.22分子量: C12H11N英文名稱:4- benzyl pyridineCAS號:2116-65-6
*砜分子式:106.14分子量: C3H6O2S英文名稱:Three methyl groupCAS號:5687-92-3
2-乙酰吡分子式:121.14分子量: C7H7NO英文名稱:2- acetyl pyridineCAS號:1122-62-9
硫代啉分子式:103.19分子量: C4H9NS英文名稱:Ma LanCAS號:123-90-0
氯兩面針堿英文名稱:Chlorination of two needlesCAS號:13063-04-2分子式:383.82分子量:C21H18ClNO4
砷鐵分子式:205.69分子量: As2Fe英文名稱:Arsenic ironCAS號:12006-21-2
直接湖藍(lán)6B英文名稱:Direct blue 6BCAS號:259444分子式:992.8分子量: C34H24N6Na4O16S4
鄰二胺英文名稱:Two amineCAS號:95-54-5分子式:108.14分子量: C6H8N2
2-(N-L-丙)-5-硝吡分子式:273.29分子量: C14H15N3O3英文名稱:2- (N-L-) -5-CAS號:115416-53-0
COX5A 細(xì)胞色素c氧化酶5A抗體 0.2ml
Phospho-CHK2 (ser33) 磷酸化細(xì)胞周期檢測點(diǎn)激酶2抗體 0.1ml
SPHK2 鞘氨醇激酶2抗體 0.2ml
ATGL 脂肪甘油三酯脂酶抗體 0.1ml
MAP4K4 絲裂原活化蛋白激酶MAP4K4抗體 0.1ml
phospho-GSK-3 Beta(Ser21+Ser29) 磷酸化葡萄糖合成激酶3β抗體 0.1ml
Rabbit Anti-Monkey IgG/Gold 膠體金標(biāo)記的兔抗猴IgG 2ml
Rabbit Anti-horse IgM/Bio 生物素標(biāo)記的兔抗馬IgM 0.1ml
DcR2/CD264/TNFRSF10D 誘捕受體2抗體 0.1ml
RASSF7 RAS家族關(guān)聯(lián)結(jié)構(gòu)域蛋白7抗體 0.2ml
CAPZA2/CapZ alpha 2 F肌動蛋白α2亞基抗體 0.1ml
phospho-ANAPC1(Ser377) 磷酸化細(xì)胞周期末期促進(jìn)復(fù)合蛋白APC1抗體 0.1ml