詳細介紹
反應五要素:
大豆特定基因序列(Lectin)核酸檢測試劑盒方法參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
使用及效果:
將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子(約1/4 黃豆大小)或直徑約為0.5-0.7 cm(或面積相當的其他形狀)的植物葉片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保溫10-15 分鐘,加入0.1 mL 溶液B,混勻,直接取上清液(相當于PCR 體積的1/10)作為模板進行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。
產品名稱 | 規格 | 分類 |
大豆特定基因序列(Lectin)核酸檢測試劑盒方法 | 48T | PCR檢測試劑盒 |
樣本采集、存放及運輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應避免反復凍融(zui多凍融3次);
3、運輸:采用泡沫箱加冰密封進行運輸。
普通PCR反應流程:
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自備物品:
大豆特定基因序列(Lectin)核酸檢測試劑盒方法15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標儀:用于微量樣品比色分析
儲存條件:
14℃或-20℃
準備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產品說明書 1份
5-四氮唑分子式:85.07分子量: CH3N5英文名稱:5- amino tetrazoliumCAS號:4418-61-5
2,4,5-三氟硝分子式:177.08分子量: C6H2F3NO2英文名稱:2,4,5- threeCAS號:2105-61-5
2-氯-6-甲吡分子式:127.57分子量: C6H6ClN英文名稱:2- -6- methyl pyridineCAS號:18368-63-3
地膚子皂苷Ic英文名稱:Momordin IcCAS號:96990-18-0分子式:764.93906分子量:C41H64O13
5-氯-2-甲氧吡分子式:143.57分子量: C6H6ClNO英文名稱:5- chloride -2- aCAS號:13473-01-3
3-乙酰-5-溴吡分子式:200.04分子量: C7H6BrNO英文名稱:3- acetyl -5-CAS號:38940-62-4
3,5-二氟三氟分子式:182.09分子量: C7H3F5英文名稱:3,5- two f three fCAS號:401-85-4
千層紙素A英文名稱:Thousand layer of paper ACAS號:480-11-5分子式:284.263分子量:C16H12O5
3-喹啉分子式:154.17分子量: C10H6N2英文名稱:3- - quinolineCAS號:34846-64-5
1-(4-溴)咪唑分子式:223.07分子量: C9H7BrN2英文名稱:1 -(4 -溴)咪唑CAS號:10040-96-7
2-氯-4--6,7-二甲氧喹唑啉分子式:239.66分子量: C10H10ClN3O2英文名稱:2- -4-, -6, 7- twoCAS號:23680-84-4
Transferrin receptor 轉鐵蛋白受體抗體 0.1ml
NRH2 死亡結構域蛋白NRH2抗體 0.2ml
SDH/Sorbitol Dehydrogenase 山梨醇脫氫酶抗體 0.1ml
CDKN1B/P27kip1 P27抗體/周期素依賴激酶抑制劑 0.1ml
LAP18/Stathmin 白血病相關蛋白18/癌蛋白18抗體 0.1ml
Phospho-NFKB1(Ser907) 磷酸化細胞核因子p50/k基因結合核因子抗體 0.1ml
SHFM3 SHFM3蛋白抗體 0.2ml
ALR 肝再生增強因子抗體 0.1ml
NEDD1 神經前體細胞表達蛋白1抗體 0.2ml
human C3 補體C3抗體 0.1ml
KCNQ-1 鉀離子通道蛋白家族KCNQ1抗體 0.1ml
phospho-NFKB p65(Ser529) 磷酸化細胞核因子抗體 0.1ml