詳細介紹
反應五要素:
羊特定基因序列(Ovine)核酸檢測試劑盒方法參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
使用及效果:
將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子(約1/4 黃豆大小)或直徑約為0.5-0.7 cm(或面積相當的其他形狀)的植物葉片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保溫10-15 分鐘,加入0.1 mL 溶液B,混勻,直接取上清液(相當于PCR 體積的1/10)作為模板進行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。
產品名稱 | 規格 | 分類 |
羊特定基因序列(Ovine)核酸檢測試劑盒方法 | 48T | PCR檢測試劑盒 |
樣本采集、存放及運輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應避免反復凍融(zui多凍融3次);
3、運輸:采用泡沫箱加冰密封進行運輸。
普通PCR反應流程:
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自備物品:
羊特定基因序列(Ovine)核酸檢測試劑盒方法15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標儀:用于微量樣品比色分析
儲存條件:
14℃或-20℃
準備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產品說明書 1份
氯錳分子式:197.91分子量: MnCI2•4H2O英文名稱:Manganese chlorideCAS號:13446-34-9
2-乙酰噻唑分子式:127.16分子量: C5H5NOS英文名稱:2- acetyl thiazoleCAS號:24295-03-2
1,2-萘二甲腈分子式:178.19分子量: C12H6N2英文名稱:1,2- naphthalene twoCAS號:19291-76-0
過氧羥異丙分子式:152.19分子量: C9H12O2英文名稱:Cumene hydroperoxideCAS號:80-15-9
二正辛砜分子式:290.51分子量: C16H34O2S英文名稱:Two normalCAS號:7726-20-7
四氮唑蘭英文名稱:Blue tetrazoliumCAS號:1871-22-3分子式:727.64分子量: C40H32Cl2N8O2
1--3-硝分子式:249.01分子量: C6H4INO2英文名稱:1- -3-CAS號:645-00-1
二甲酚橙英文名稱:Two xylenol orangeCAS號:1611-35-4分子式:716.62分子量: C31H32N2O13S:C3
2,2'-二硫二吡分子式:220.31分子量: C10H8N2S2英文名稱:2,2'- two twoCAS號:82979
硫酸鋁分子式:666.43分子量: Al2(SO4)3·18H2O英文名稱:Aluminium sulfateCAS號:7784-31-8
(-)-并四咪唑分子式:252.34分子量: C15H12N2S英文名稱:(-)-并四咪唑CAS號:950194-37-3
Calpain 2 鈣激活的中性蛋白酶2抗體 0.1ml
HIPK3 Fas相互作用蛋白激酶3抗體 0.2ml
CAP57 中性粒細胞殺菌蛋白BP30抗體 0.2ml
Goat Anti-human IgM/AP 堿性磷酸酶(AP)標記的羊抗人IgM 0.1ml
TMEM166 跨膜蛋白166抗體 0.2ml
Plectin 網蛋白抗體 0.2ml
NAIF1 protein 核凋亡誘導因子蛋白1 0.2ml
CDK9/Cyclin T1 周期素依賴性激酶9抗體 0.1ml
FAIM1 FAS凋亡抑制分子1抗體 0.2ml
ATG8/GABARAPL2 G1氨基A型受體相似蛋白2抗體 0.2ml
C17orf97 17號染色體開放閱讀框97抗體 0.2ml
PIBF1/C13orf24 孕酮誘導阻斷因子1抗體 0.2ml