詳細介紹
反應五要素:
轉基因植物PAT基因核酸檢測試劑盒方法參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
使用及效果:
將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子(約1/4 黃豆大小)或直徑約為0.5-0.7 cm(或面積相當的其他形狀)的植物葉片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保溫10-15 分鐘,加入0.1 mL 溶液B,混勻,直接取上清液(相當于PCR 體積的1/10)作為模板進行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。
產品名稱 | 規格 | 分類 |
轉基因植物PAT基因核酸檢測試劑盒方法 | 48T | PCR檢測試劑盒 |
樣本采集、存放及運輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應避免反復凍融(zui多凍融3次);
3、運輸:采用泡沫箱加冰密封進行運輸。
普通PCR反應流程:
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自備物品:
轉基因植物PAT基因核酸檢測試劑盒方法15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標儀:用于微量樣品比色分析
儲存條件:
14℃或-20℃
準備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產品說明書 1份
6-氯-4-羥喹啉分子式:179.6分子量: C9H6ClNO英文名稱:6- -4- hydroxy groupCAS號:23432-43-1
5-氟胞嘧分子式:129.09分子量: C4H4FN3O英文名稱:5- fluorocytosineCAS號:2022-85-7
乙氧嘧磺隆英文名稱:Ethoxy sulfometuronmethylCAS號:126801-58-9分子式:398.39分子量: C15H18N4O7S
鄰三酚紅英文名稱:The adjacent benzene three phenol redCAS號:32638-88-3分子式:400.36分子量: C19H12O8S
直接綠BE英文名稱:Direct green BECAS號:分子式:分子量:
聚對二甲分子式:分子量:英文名稱:ParyleneCAS號:
阿利多分子式:251.28分子量: C13H17NO4英文名稱:AlibendolCAS號:26750-81-2
1,4-二溴-2,5-二氟分子式:271.88分子量: C6H2Br2F2英文名稱:1,4- two - dibromo -2,5-CAS號:327-51-5
4-溴乙酰聯分子式:275.15分子量: C14H11BrO英文名稱:4- bromideCAS號:135-73-9
鉍鉀分子式:1253.7分子量: BiI3·4KI英文名稱:Bismuth potassium iodideCAS號:41944-01-8
2-甲-5-硝對二胺英文名稱:2- methyl -5- nitro group twoCAS號:25917-89-9分子式:167.17分子量: C7H9N3O2
轉基因植物PAT基因核酸檢測試劑盒方法CASPR/Neurexin4 軸突蛋白4/少突膠質細胞抗體 0.2ml
CDH11/OB-Cadherin 鈣粘附蛋白-11抗體 0.1ml
C16orf61 16號染色體開放閱讀框61抗體 0.2ml
Myosin-XVIIIb 肌球蛋白XVIIIb抗體 0.2ml
FNDC2/5 Ⅲ型纖維連接蛋白域蛋白2/5抗體 0.2ml
Rabbit Anti-Goat IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標記的兔抗羊IgG 0.1ml
Goat Anti-rat IgG 羊抗大鼠IgG 1mg
Sema7A/CD108 軸突生長因子CD108抗體 0.2ml
TPST1 酪蛋白硫酸轉移酶1抗體 0.2ml
HCN2 鉀/鈉超極化激活環核苷酸門控通道蛋白2抗體 0.2ml
UGCG/Ceramide glucosyltransferase 葡萄糖神經酰胺合成酶抗體 0.1ml
RNF186 環指蛋白186抗體 0.2ml