詳細介紹
反應五要素:
豬圓環病毒通用型(PCV-U)核酸檢測試劑盒方法參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
使用及效果:
將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子(約1/4 黃豆大小)或直徑約為0.5-0.7 cm(或面積相當的其他形狀)的植物葉片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保溫10-15 分鐘,加入0.1 mL 溶液B,混勻,直接取上清液(相當于PCR 體積的1/10)作為模板進行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。
產品名稱 | 規格 | 分類 |
豬圓環病毒通用型(PCV-U)核酸檢測試劑盒方法 | 48T | PCR檢測試劑盒 |
樣本采集、存放及運輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應避免反復凍融(zui多凍融3次);
3、運輸:采用泡沫箱加冰密封進行運輸。
普通PCR反應流程:
?
自備物品:
豬圓環病毒通用型(PCV-U)核酸檢測試劑盒方法15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標儀:用于微量樣品比色分析
儲存條件:
14℃或-20℃
準備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產品說明書 1份
DAABD-Cl分子式:304.75分子量: C10H13ClN4O3S英文名稱:daabd CLCAS號:664985-43-7
1-正丁-4[(4-甲氧)乙炔]分子式:264.36分子量: C19H20O英文名稱:1- butyl -4[(4-) - phenyl groupCAS號:35684-12-9
1,4-雙(4-氧)分子式:292.33分子量: C18H16N2O2英文名稱:1,4- bis (4-) benzeneCAS號:581437
2-氟-5-(三氟甲)吡分子式:165.09分子量: C6H3F4N英文名稱:2- -5- (three) pyridineCAS號:69045-82-5
2-氯-5-吡分子式:138.55分子量: C6H3ClN2英文名稱:2- chloro -5- cyanopyridineCAS號:33252-28-7
東莨菪素英文名稱:ScopoletinCAS號:92-61-5分子式:192.168分子量:C10H8O4
2--4-氯嘧分子式:129.55分子量: C4H4ClN3英文名稱:2- amino -4-CAS號:3993-78-0
1-甲氧萘分子式:158.2分子量: C11H10O英文名稱:1- methyl groupCAS號:2216-69-5
間-雙溴甲分子式:421.75分子量: C6H4(CHBr2)2英文名稱:Inter - bisCAS號:36323-28-1
2-*硅噻唑分子式:157.31分子量: C6H11NSSi英文名稱:2- three trimethylsilyl thiazoleCAS號:79265-30-8
5--2,2-二氟-1,3-并二噁唑分子式:173.12分子量: C7H5F2NO2英文名稱:5- -2,2- two -1,3- fluorine amino benzene and two oxazoleCAS號:1544-85-0
豬圓環病毒通用型(PCV-U)核酸檢測試劑盒方法EGF 小鼠抗表皮生長因子抗體 0.1ml
Protein A 重組金黃色葡萄球菌蛋白A抗體 0.1ml
phospho-Dnmt1(Ser154) 磷酸化DNA甲基轉移酶1抗體 0.1ml
IFN-Beta 干擾素β抗體 0.1ml
Donkey Anti-human IgG/RBITC 羅丹明標記的驢抗人IgG 0.1ml
hnRNP R 異質性核糖核蛋白R 0.2ml
LCA5 致盲基因LCA5蛋白抗體 0.2ml
PRKCDBP 蛋白激酶C delta結合蛋白抗體 0.2ml
SMURF1 Smad蛋白E3泛素連接酶1抗體 0.2ml
phospho-FAK(Ser732) 磷酸化粘著斑激酶抗體 0.1ml
COX4NB COX4NB蛋白抗體 0.2ml
Phospho-Histone H3 (Thr3) 磷酸化組蛋白H3抗體 0.1ml