詳細介紹
反應五要素:
豬水泡性口炎病毒(VSV)核酸檢測試劑盒方法參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
使用及效果:
將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子(約1/4 黃豆大?。┗蛑睆郊s為0.5-0.7 cm(或面積相當?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保溫10-15 分鐘,加入0.1 mL 溶液B,混勻,直接取上清液(相當于PCR 體積的1/10)作為模板進行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 分類 |
豬水泡性口炎病毒(VSV)核酸檢測試劑盒方法 | 48T | PCR檢測試劑盒 |
樣本采集、存放及運輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應避免反復凍融(zui多凍融3次);
3、運輸:采用泡沫箱加冰密封進行運輸。
普通PCR反應流程:
?
自備物品:
豬水泡性口炎病毒(VSV)核酸檢測試劑盒方法15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標儀:用于微量樣品比色分析
儲存條件:
14℃或-20℃
準備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
1-(4-乙氧)乙炔-4-正戊分子式:292.41分子量: C21H24O英文名稱:1- (4- ethoxyphenyl) ethynyl -4- amyl benzeneCAS號:95480-29-8
順式-2,6-二甲分子式:113.2分子量: C7H15N英文名稱:Two cis -2,6- methyl piperidineCAS號:766-17-6
堿性藍G英文名稱:Alkaline blue GCAS號:分子式:分子量:
3-甲酸甲酯鹽酸鹽分子式:165.61798分子量: C6H12ClNO2英文名稱:3- methyl piperidine hydrochlorideCAS號:
3--2-氯吡分子式:128.56分子量: C5H5ClN2英文名稱:3- amino -2-CAS號:6298-19-7
2,2'-雙(三氟甲)-4,4'-二聯(lián)分子式:320.23分子量: C14H10F6N2英文名稱:2,2'- bis (three f) -4,4'- twoCAS號:341-58-2
伊紅次甲蘭英文名稱:Red methylene blueCAS號:分子式:分子量:
喹啉分子式:129.16分子量: C9H7N英文名稱:QuinolineCAS號:91-22-5
1-(2-溴乙氧)-2,4-二氯分子式:269.95分子量: C8H7BrCl2O英文名稱:1- (2-) -2,4- twoCAS號:6954-77-4
2-萘酚-1磺鈉鹽英文名稱:2- -1 naphthol sulfonic acid sodium saltCAS號:分子式:分子量:
醋硝豆素英文名稱:Vinegar nitrateCAS號:152-72-7分子式:353.33分子量: C19H15NO6
豬水泡性口炎病毒(VSV)核酸檢測試劑盒方法CD45/B220 白細胞共同抗原抗體 0.1ml
Donkey Anti-Guinea pig IgG/PE-Cy3 PE-Cy3標記的驢抗豚鼠IgG 0.1ml
Rabbit Anti-Biotin/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標記的兔抗生物素抗體IgG 0.1ml
TWIST protein TWIST蛋白抗體 0.1ml
CXCL16 CXC趨化因子16抗體 0.1ml
Nucleolar protein 3/Apoptosis repressor with CARD 核仁蛋白3抗體 0.2ml
Gliomedin/COLM 神經(jīng)膠質(zhì)蛋白(肝癌相關(guān)基因2)抗體 0.2ml
NANOS2 生殖細胞增殖相關(guān)蛋白NANOS2抗體 0.2ml
Brain protein CG6 腦蛋白CG6抗體 0.2ml
phospho-14-3-3 protein zeta/delta(Ser58) 磷酸化14-3-3 α/β/ζ抗體 0.1ml
MARCH6 膜相關(guān)環(huán)指蛋白6抗體 0.2ml
phospho-CDH2 (Tyr820) 磷酸化N-鈣粘附分子抗體 0.1ml