詳細介紹
木霉屬通用PCR檢測試劑盒品牌使用及效果:
將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子(約1/4 黃豆大小)或直徑約為0.5-0.7 cm(或面積相當?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保溫10-15 分鐘,加入0.1 mL 溶液B,混勻,直接取上清液(相當于PCR 體積的1/10)作為模板進行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 分類 |
木霉屬通用PCR檢測試劑盒品牌 | 50T | PCR檢測試劑盒 |
樣本采集、存放及運輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(zui多凍融3次);
3、運輸:采用泡沫箱加冰密封進行運輸。
普通PCR反應(yīng)流程:
?
自備物品:
木霉屬通用PCR檢測試劑盒品牌15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標儀:用于微量樣品比色分析
儲存條件:
14℃或-20℃
準備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
LoVo(人大腸細胞)5×106cells/瓶×2
Hs 578T(人腺細胞)5×106cells/瓶×2
HCT 116(人結(jié)腸細胞)5×106cells/瓶×2
真核細胞膜蛋白抽提試劑(帶酶抑制劑)50次國產(chǎn)
293T/胚腎細胞株國產(chǎn)
大鼠脈絡(luò)膜血管細胞*培養(yǎng)基100mL
HBZY-1(大鼠腎小球系膜細胞)5×106cells/瓶×2
甘露醇高鹽瓊脂/甘露醇鹽瓊脂/甘露醇鈉瓊脂/Mannitol Salt Aga金黃色葡萄球菌的選擇性分離培養(yǎng)250克國產(chǎn)/進口
H9c2大鼠心肌細胞(ATCC來源)
小鼠子宮內(nèi)膜上細胞*培養(yǎng)基100mL
BxPC-3(人原位胰腺腺細胞)5×106cells/瓶×2
木霉屬通用PCR檢測試劑盒品牌Mannan Binding Lectin 甘露聚糖結(jié)合凝集素抗體 0.2ml
OVA/SerpinB8 雞卵白蛋白/卵清蛋白抗體 0.1ml
FN/Fibronectin 1 纖維連接蛋白抗體 0.1ml
APOL3 載脂蛋白L3抗體 0.2ml
Bub1 紡錘體檢查點蛋白抗體 0.2ml
phospho-EphB1/Eph receptor B1(Tyr317) 磷酸化酪氨酸蛋白激酶受體B1抗體 0.1ml
NLGN2 神經(jīng)連接蛋白2抗體 0.2ml
ENO1+ENO2+ENO3 神經(jīng)元,肌肉特異性烯醇化酶抗體 0.2ml
KLK4 激肽釋放酶4抗體 0.1ml
GABBR2/GB2 G氨基B型受體2抗體 0.1ml
FAAH2 脂肪酸酰胺水解酶2抗體 0.1ml
NME1/Nm23-H1/NDKA 腫瘤抑制基因抗體 0.1ml
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。