詳細(xì)介紹
反應(yīng)五要素:
施馬倫貝格病毒PCR檢測(cè)試劑盒品牌參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
使用及效果:
將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子(約1/4 黃豆大小)或直徑約為0.5-0.7 cm(或面積相當(dāng)?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保溫10-15 分鐘,加入0.1 mL 溶液B,混勻,直接取上清液(相當(dāng)于PCR 體積的1/10)作為模板進(jìn)行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 分類 |
施馬倫貝格病毒PCR檢測(cè)試劑盒品牌 | 50T | PCR檢測(cè)試劑盒 |
樣本采集、存放及運(yùn)輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過(guò)72h,-70℃以下可長(zhǎng)期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(zui多凍融3次);
3、運(yùn)輸:采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
普通PCR反應(yīng)流程:
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自備物品:
施馬倫貝格病毒PCR檢測(cè)試劑盒品牌15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標(biāo)儀:用于微量樣品比色分析
儲(chǔ)存條件:
14℃或-20℃
準(zhǔn)備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書 1份
QGY-7701(人肝細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
HUVEC, 人臍靜脈內(nèi)細(xì)胞
Calu-1(人肺細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
Endogenous Enzymes Blocking Buffer/內(nèi)源性堿性磷酸酶封閉液10ml國(guó)產(chǎn)
小鼠腎實(shí)質(zhì)細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
B16-F10(小鼠膚黑色素瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
小鼠表黑色素細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
1% NaC1甘露醇發(fā)酵管BR20支國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口
人食管上細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
MiddleBrook 7H10瓊脂/MiddleBrook 7H10 Agar分枝桿菌的分離培養(yǎng)250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口
人淋巴成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
施馬倫貝格病毒PCR檢測(cè)試劑盒品牌Ube2G1/UBC7 泛素蛋白連接酶G1抗體 0.2ml
CRX1 CRX抗體 0.1ml
GLP2R 胰高血糖素樣肽2受體抗體 0.2ml
BSA/Bovine Serum Albumin 牛血清白蛋白抗體 0.1ml
Phospho-NFKB p65(Ser468) 磷酸化細(xì)胞核因子NF-κB p65抗體 0.1ml
IL-6 白介素6 0.1ml
WDR26 心肌缺血預(yù)處理正調(diào)節(jié)蛋白2抗體 0.2ml
VGLL1 轉(zhuǎn)錄輔助因子退變樣蛋白1抗體 0.2ml
ENO3 骨骼肌烯醇化酶抗體 0.2ml
SRRM1 絲氨酸/氨酸相關(guān)核基質(zhì)蛋白1抗體 0.2ml
phospho-Cdc25B (Ser186) 磷酸化細(xì)胞分裂周期蛋白25B抗體 0.1ml
Laminin 1+2 層粘連蛋白1+2抗體 0.1ml