詳細介紹
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產品名稱 | 非凋亡 DNAout24 次圖片 |
規格 | 100mL |
價格 | 電詢 |
公司非凋亡 DNAout24 次圖片的RNA/DNA提取目錄有下面10個系列,5000余種產品:點擊了解更RNA純化。
1、RNA純化系列產品
2、DNA純化系列產品
3、電泳及回收系列產品
4、探針標記及檢測系列產品
5、核酸擴增系列產品
6、克隆表達系列產品
7、基因組研究系列產品
8、蛋白質研究系列產品
9、細胞生物學研究系列產品
10、即用型溶液、質粒庫、菌種庫等等
非凋亡 DNAout24 次圖片的詳細介紹:
非凋亡 DNAout24 次圖片DNA提取流程圖:
問:常用的DNA 濃度及純度檢測方法有哪些?
稱答非凋亡 DNAout24 次圖片回收得到的DNA 可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。瓊脂糖凝膠電泳通過對比定量的Marker 來定量濃度;紫外分光檢測OD260/280 比值,OD260/280 比值在1.7-1.9 之間說明所得 DNA 純度較好,如果洗脫時不使用溶液Eluent而使用去離子水,比值會偏低,因為pH 值和離子存在會影響光吸收值,但不表示純度低。
問:長段回收時應注意哪些問題?
答:當DNA段長度較長(5 kb 以上)時,回收效率會有所下降,這是DNA 切膠回收時的常見現象。此時建議按以下方法解決問題:
1 適當增加待回收DNA 樣品的點樣量;
2 由于長段DNA 不易從樹脂上洗脫下來,建議洗脫兩次,可以提高洗脫效率;
3 減少操作過程中對長段DNA 的物理損傷,如混合振蕩操作不要過于劇烈,切膠時不要將DNA 長時間暴露在紫外等下。
非凋亡 DNAout24 次圖片注意事項:
●溶液PE *次使用前請按瓶上標簽加入4 倍體積的無水乙醇,即15 ml 溶液PE 中加入60 ml 無水乙醇,20 ml 溶液PE 中加入80 ml 無水乙醇,使用后立即蓋緊蓋子。
● 本產品對電泳使用的Agarose 種類沒有嚴格限制,可以使用普通Agarose 。為了保證回收DNA 的質量和DNA 回收效率,希望使用高純度的Agarose ,但沒有必要一定要使用低熔點的Agarose 等。
● 電泳時請使用新鮮配制的TAE 電泳緩沖液,以免影響電泳及回收效果。
● 請適當延長電泳時間,在條帶分離清晰后進行切膠回收,以免回收到多余雜帶。
● 為提高DNA 回收收率,切膠時應盡量除去多余的膠塊。
● 本試劑盒純化柱的DNA 吸附能力強。但如果DNA 濃度小,或DNA 初始量少,回收率將會偏低。
● 溶液Eluent(10 mM Tris-HCl, pH 8.5)中不含EDTA,其收集的DNA 段可直接用于各種酶促反應等,不會影響后續試驗。
● 為了保證回收效率,請不要使用未調整pH 值的超純水洗脫目的段。
● 請嚴格按照操作步驟操作。2-苯基丙烯酸 492-38-6
2-溴-4,6-二甲基吡啶 4926-26-5
1H-1,2,4-三氮唑-3-羧酸 4928-87-4
4-羥基-2-甲基苯硼酸 493035-82-8
L-焦谷氨酸甲酯 4931-66-2
吖啶橙 494-38-2
丙酰乙酸乙酯 4949-44-4
4-(三氟甲氧基)苯基乙腈 49561-96-8
非諾貝特 49562-28-9
4-氰基苯磺酰氯 49584-26-1
6-氯煙酸乙酯 49608-01-7
2-氯煙酰氯 49609-84-9
茚滿 496-11-7
苯并呋喃-2-羧酸 496-41-3
7-溴喹啉 4965-36-0
3,4-二氨基甲苯 496-72-0
5-氰基-3-吡啶基 硼 酸 497147-93-0 SNIP1 Smad核相互作用蛋白1抗體
Syntaxin 6 突觸融合蛋白6抗體
Sprouty1 軟脂酰化磷蛋白Sprouty1抗體
SH3TC2 脫髓鞘相關蛋白SH3TC2N抗體
SHANK2 富含脯氨酸突觸相關蛋白SHANK2抗體
SHARPIN 線性泛素鏈相關蛋白SHARPIN抗體
SAMD7 SAMD7蛋白抗體
SAMD3 SAMD3蛋白抗體
非凋亡 DNAout24 次圖片Syntrophin gamma 2 肌蛋白結合蛋白γ2抗體
SOX22 核轉錄因子SOX22抗體
SOX4 核轉錄因子SOX4抗體
SUFU/Suppressor of Fused 抑制Hh信號通路蛋白SUFU抗體
SNAIL Snail蛋白抗體
SARP1 分泌細胞凋亡相關蛋白1抗體
SMARCD3 肌動蛋白依賴染色質調控因子SMARCD3蛋白抗體
SLC25A6 線粒體載體腺嘌呤核苷酸轉運蛋白6抗體
SODD Bcl2結合抗凋亡蛋白4抗體
C10orf27 第10號染色體開放閱讀框27抗體
操作步驟:
1非凋亡 DNAout24 次圖片切取含有目的DNA段的瓊脂糖凝膠條帶。
● 盡量切除不含有目的DNA 部分的凝膠,減少凝膠體積,提高DNA 回收率。
● 切膠時,請使用長波長UV (360 nm )光盒。且不要將DNA 長時間暴露在紫外燈下,以防DNA 損傷。
2 稱取凝膠的重量近似地確定其體積。
● 凝膠重量的稱量方法:取1.5 ml 離心管電子天平稱初質量,切膠裝在離心管后稱終質量,兩者差即為膠的質量。不同離心管的重量可能有差異,因此,每個離心管的重量需單獨稱量。
3 按照每100 mg 瓊脂糖凝膠對應100 µl 溶液BD 的比例,向離心管中加入溶液BD。
4 50 ℃水浴7-10min,直至凝膠*溶化。期間需要振蕩混合3 次。
● 瓊脂糖必須*融化,以免堵塞柱子,嚴重影響DN段的回收效率。
● 如果總體積大于500 µl,可適當增加溶膠時間。
● 若此時溶液變紅,可加10 µl 3M NaAC (pH 5.2)。
5 將步驟4 所獲溶液置于DNA 純化柱中,靜置2min 。
● 膠塊*溶解后將膠溶液溫度降至室溫再上柱,因為純化柱在較高溫度時結合DNA 的能力較弱。
6 12,000 rpm 離心1min。若溶液量大于DNA 純化柱的容積,可分兩次離心,棄濾液。
● 此時DNA 片段被吸附于DNA 純化柱中的硅膠膜上。
7 加入500 µl 溶液BD。12,000 rpm, 離心1min,棄濾液
8 加入500 µl 溶液PE。12,000 rpm, 離心1min,棄濾液。
● 溶液PE 初次使用前用無水乙醇按1: 4 稀釋,即含80% 乙醇。
● 此步驟的作用是將硅膠膜上吸附的蛋白、鹽等雜質洗脫,以獲得高質量DNA 片段。
9 加入500 µl 溶液PE。12,000 rpm, 離心1min,棄濾液。
10 12,000 rpm 離心 3min ,以*去除純化柱中的液體。
● 此步驟的作用是去除殘留乙醇,避免殘留乙醇影響后續酶促反應。同時也利于DNA 片段的充分溶解。
11 將離心柱置于新的1.5 ml 離心管中。向純化柱的中央處,懸空滴加30-100 µl 溶液Eluent (60℃預熱),靜置2min 。12,000 rpm 離心1min,管底即為目的DNA 片段。貯存于-20℃。
● 溶液Eluent 可用無菌雙蒸水代替,但其pH 需為8.0-8.5,加入體積視DNA 目的片段的多少、用戶對目的片段濃度要求而定。
● 對溶液Eluent 60℃預熱,會提高提取DNA 目的片段的產量。