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詳細介紹
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產品屬性：
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
| 兔肺大靜脈內皮細胞 | 5×10?Cells/T25培養瓶 | GOY-01X0863 |
商品介紹：
名稱 兔肺大靜脈內皮細胞 2.組織來源：肺靜脈組織 3.產品規格：5×105cells/T25細胞培養瓶 4.細胞簡介： 兔肺大靜脈內皮細胞分離自肺大靜脈組織；肺大靜脈在用肺呼吸的脊椎動物中，把動脈血由肺送回心臟的靜脈，是一個靜脈里流動脈血的血管。左右1對，共4條，兩條連接右肺，兩條連接左肺。肺靜脈異位引流是指肺靜脈未能直接與左心房連接，而與右心房或體靜脈系統連接的先天性心血管異位。肺靜脈淤血性肺動脈高壓，是由于肺靜脈內血液淤滯而引起的肺動脈高壓。正常情況下，肺循環具有血壓低、阻力小和順應性大的特點，肺動脈壓力高低取決于單位時間內肺動脈血流量和肺血管的阻力，要維持肺循環的低壓、低阻的狀態，必須保證整個肺循環系統的暢通無阻，血液順利地由肺動脈經毛細血管進入肺靜脈，再入左心室，經過左心室收縮進入體循環，才能避免肺動脈內壓力升高。細胞呈多邊形鵝卵石狀排列；該細胞在維持血管內外的動態平衡、合成和分泌細胞因子和介質、維持凝血和纖溶的動態平衡中起重要作用。 5.方法簡介： 實驗室分離的兔肺大靜脈內皮細胞采用胰蛋白酶-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法、并通過內皮細胞專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質量檢測： 實驗室分離的兔肺大靜脈內皮細胞經CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養信息： 包被條件PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%） 培養基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產品貨號CM-Rb045 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態內皮細胞樣 傳代特性可傳1-3代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實驗報告：
一、分離與培養：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
小鼠 CTNNB1 基因全長ORF克隆
小鼠 FGF9 基因全長ORF克隆
小鼠 GSK3B 基因全長ORF克隆
小鼠 TLR6 基因全長ORF克隆
小鼠 WNT3 基因全長ORF克隆
小鼠 CD8B 基因全長ORF克隆
小鼠 WNT-4 基因全長ORF克隆
小鼠 MAP2K4 基因全長ORF克隆
小鼠 SEMA4D 基因全長ORF克隆
小鼠 SDC1 基因全長ORF克隆
兔肺大靜脈內皮細胞胰蛋白胨大豆瓊脂顆粒 英文名稱：TSA Agar 產品規格：250g
0.312-20 ng/mL 人甘油酸激1(Phosphoglycerate kinase 1)ELISA試劑盒
改良愛德華瓊脂基礎 英文名稱：Edwards Medium,Modified 產品規格：250g
15.6-1000 pg/mL 人胰高血糖素(Glucagon)ELISA試劑盒
3%NaCl乳糖 英文名稱： 產品規格：20支
0.156-10 ng/mL 鉤端螺旋體(Lep)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
0.156-10 ng/mL 人雙重特異性促分裂原活化蛋白激激1(MAP kinase kinase 1)ELISA試劑盒
硝酸鹽肉湯（還原）（軍團菌） 英文名稱： 產品規格：20支/盒
0.78-50 ng/mL 豬瘟病毒(CSFV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
0.156-10 ng/mL 人甘露糖結合蛋白C(MBP-C)ELISA試劑盒
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