產(chǎn)品名稱

名稱    神經(jīng)少突膠質(zhì)細(xì)胞

2.組織來(lái)源：腦組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡(jiǎn)介：

人神經(jīng)少突膠質(zhì)細(xì)胞分離自腦皮層組織；大腦分左右兩個(gè)半球，大腦皮質(zhì)（灰質(zhì)）覆蓋著每個(gè)大腦半球的大部分，它是神經(jīng)元胞體集中的地方。內(nèi)部則是由神經(jīng)纖維或髓鞘構(gòu)成的白質(zhì)。每一個(gè)半球都有三個(gè)面，即外側(cè)面（約占整個(gè)皮質(zhì)面積的1/3）、內(nèi)側(cè)面和底面（占2/3的面積）；半球表面有很多深淺不等的溝或裂，溝或裂之間的隆起叫回，它們大大增加了大腦的表面積；大腦外側(cè)面重要的溝、裂有大腦外側(cè)裂、頂枕裂和中央溝。由于三溝裂之界隔，使大腦皮質(zhì)組分為額葉、頂葉、顳葉、枕葉四大部分。少突膠質(zhì)細(xì)胞分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，在銀浸染標(biāo)本中，少突膠質(zhì)細(xì)胞比星狀膠質(zhì)細(xì)胞小，其突起也較小而少，呈珠狀，故被稱為少突膠質(zhì)細(xì)胞或寡突膠質(zhì)細(xì)胞。但是用特異性免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示的少突膠質(zhì)細(xì)胞，其突起并不少，而且還有許多分支。少突膠質(zhì)細(xì)胞的主要功能是在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中包繞軸突、形成絕緣的髓鞘結(jié)構(gòu)、協(xié)助生物電信號(hào)的跳躍式高效傳遞并維持和保護(hù)神經(jīng)元的正常功能。其異常不僅會(huì)導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘病變，還會(huì)引起神經(jīng)元損傷或精神類疾病，甚至可以引發(fā)腦腫瘤。根據(jù)少突膠質(zhì)細(xì)胞的分布和位置可分為三種：①束間少突膠質(zhì)細(xì)胞（interfasicular-oligodendrocyte），分布在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的白質(zhì)的神經(jīng)纖維束之間；②神經(jīng)細(xì)胞周少突膠質(zhì)細(xì)胞（perineuronal-oligodendrocyte），分布在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的灰質(zhì)區(qū)，常位于神經(jīng)細(xì)胞周圍，與神經(jīng)細(xì)胞的關(guān)系密切，故又稱為神經(jīng)細(xì)胞周衛(wèi)星細(xì)胞（perineuronal-satellite-cell），但在神經(jīng)細(xì)胞胞體與此類細(xì)胞之間亦常有星形膠質(zhì)細(xì)胞的薄片狀突起分隔；③血管周少突膠質(zhì)細(xì)胞（pcrivascular-oligodendrocyte），主要分布在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的血管周圍。少突膠質(zhì)細(xì)胞形成的髓鞘膜是最為特化和復(fù)雜動(dòng)物細(xì)胞膜之一，其上有眾多跨膜蛋白和表面蛋白用以維持髓鞘的致密穩(wěn)定結(jié)構(gòu)。如半乳糖腦苷脂（GC），它是髓鞘的一種主要類脂，用GC抗體鑒別成熟的少突膠質(zhì)細(xì)胞是一種比較早的免疫鑒定方法。近十年來(lái)，神經(jīng)發(fā)育學(xué)科進(jìn)展較快，更多的少突膠質(zhì)細(xì)胞分子標(biāo)記物被鑒定出來(lái)，如PDGFRa、Mbp、CNP、SOX-10。

5.方法簡(jiǎn)介：

實(shí)驗(yàn)室分離的人神經(jīng)少突膠質(zhì)細(xì)胞采用胰蛋白酶消化、混合細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)缺失培養(yǎng)、搖床振蕩結(jié)合差速貼壁法并通過(guò)專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測(cè)：

實(shí)驗(yàn)室分離的人神經(jīng)少突膠質(zhì)細(xì)胞經(jīng)GC（Galactocerebroside）免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基含B-27 Supplement、PDGF-AA、bFGF、Penicillin、Streptomycin等

產(chǎn)品貨號(hào)CM-H121

換液頻率每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性貼壁

細(xì)胞形態(tài)梭形、多角形

傳代特性不增殖；不傳代

消化液0.25%胰蛋白酶

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

產(chǎn)品特點(diǎn):

1、 使用方便:不需昂貴設(shè)備。

2、 可以處理各種細(xì)菌菌體，包括新鮮菌液和冰凍菌體。

3、 將蛋白提取的時(shí)間縮短至30分鐘-1小時(shí)。

4、 采用溫和的中性裂解組分，保持蛋白活性。

5、 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

6、 紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。

7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。

8、 本試劑盒中不有EDTA，與金屬螯和層析等兼容。

細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

一、凍存時(shí)的注意事項(xiàng)：

1. 在冷凍保存之前，應(yīng)觀察細(xì)胞生長(zhǎng)是否良好(log phase) 且存活率高，凍存的細(xì)胞密度為80 – 90 ％最佳

2. 冷凍前檢測(cè)細(xì)胞是否保有其*性質(zhì)，例如是否有雜細(xì)胞或者支原體等。

3. 使用的DMSO 應(yīng)為試劑級(jí)等級(jí)，以5~10 ml 小體積分裝，4 度避光保存，勿作多次解凍。使用的甘油也應(yīng)為試劑級(jí)等級(jí)，以高壓蒸汽

滅菌后避光保存。在開(kāi)啟后一年內(nèi)使用，因長(zhǎng)期儲(chǔ)存后對(duì)細(xì)胞會(huì)有毒性。

4. 冷凍保存的細(xì)胞濃度：

4-1. 正常的成纖維細(xì)胞: 1-3x 10^6 cells/ml

4-2 雜交瘤細(xì)胞: 1~3 x 10^6 cells/ml，細(xì)胞濃度不要太高，某些雜交瘤會(huì)因冷凍濃度太高而在解凍24 小時(shí)后。

4-3.貼壁腫瘤細(xì)胞: 1 x 10^6，依細(xì)胞種類而異。腺癌類的細(xì)胞解凍后須較高之濃度，而HeLa 只需1-3 x 10^6 cells/ml。

4-4. 懸浮細(xì)胞: 5~10 x 10^6 cells/ml, 而淋巴類細(xì)胞須至少5 x 10^6 cells/ml。

5. 冷凍保護(hù)劑濃度為5 %或10 ％ DMSO，若是不確定細(xì)胞之冷凍條件，在做冷凍保存之同時(shí)，亦應(yīng)作一個(gè)backup culture，以防止冷凍失敗。

收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。

1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者過(guò)夜，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

3. 細(xì)胞傳代

1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養(yǎng)液終止消化；

3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4) 待細(xì)胞*貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。