化工儀器網
詳細介紹
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產品屬性：
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
| 肺小動脈平滑肌細胞 | 5×10?Cells/T25培養瓶 | GOY-01X1363 |
商品介紹：
名稱 肺小動脈平滑肌細胞 2.組織來源：肺小動脈組織 3.產品規格：5×105cells/T25細胞培養瓶 4.細胞簡介： 人肺小動脈平滑肌細胞分離自肺小動脈組織；小動脈（smallartery），管徑在0.3～1mm之間，小動脈包括粗細不等的幾級分支，也屬肌性動脈。較大的小動脈，內膜有明顯的內彈性膜，中膜有幾層平滑肌，外膜厚度與中膜相近，一般沒有外彈性膜。小動脈是決定周圍循環阻力大小的主要因素，也是調節微循環灌注量的“總開關"。典型的小動脈，其管壁的厚度與管徑相比約為1∶2。中膜的肌層相對比其他動脈為厚，當平滑肌在神經支配下強力收縮時，其管腔可以*閉塞，而使血液不能流入它所分布的毛細血管內，從而增加了周圍血液循環的阻力。如果有許多小動脈同時收縮，可使血壓顯著上升。反之，當小動脈的平滑肌舒張時，則可使大量的血液流入毛細血管，外周阻力明顯下降，血壓降低。終末小動脈（terminal arteri-ole）的口徑為20～30μm；后小動脈（metar-teriole），又稱毛細血管前小動脈（precapil-lary arteriole）的口徑為12～15μm。管壁內均有較稀疏的平滑肌，在毛細血管前小動脈分支的起始部分，管壁平滑肌成分增厚，叫做毛細血管前括約?。?/span>precapillary sphinc-ter），其收縮或舒張，可調節真毛細血管的血流量，是調節微循環灌注量的“分開關"。 5.方法簡介： 實驗室分離的人肺小動脈平滑肌細胞采用中性蛋白酶-膠原酶聯合消化法制備而來制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質量檢測： 實驗室分離的人肺小動脈平滑肌細胞經α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養信息： 培養基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產品貨號CM-H236 換液頻率每2-3天換液一次； 生長特性貼壁 細胞形態成纖維細胞樣 傳代特性可傳3-5代左右 消化液0.25%胰蛋白酶 培養條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實驗報告：
一、分離與培養：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
大鼠 Syndecan-1 / SDC1 / CD138 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 CD83 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 CD79B / B29 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 KIT / c-KIT 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 Contactin 3 / CNTN3 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 REG3A 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 REG3A 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 REG4 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 IFNA5 / IFNaG 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 CD70 / CD27L / TNFSF7 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
肺小動脈平滑肌細胞緊密連接蛋白12抗體Human CES5A(Carboxylesterase 5A) ELISA Kit人尿激（UK）ELISA試劑盒,
CHIC2蛋白抗體Human PARM1(Prostate androgen-regulated mucin-like protein 1) ELISA Kit人心肌營養素1（CT-1）ELISA試劑盒,
化周期檢測點激1抗體Human LETMD1(LETM1 domain-containing protein 1) ELISA Kit人血管生成素受體/含球蛋白樣環和上皮生長因子樣域激1（Tie1）ELISA試劑盒,
化周期檢測點激2抗體Human FAF2(FAS-associated factor 2) ELISA Kit人類似cDNA順序BC027382 ELISA試劑盒,
化周期檢測點激2抗體Human SPINK7(Serine protease inhibitor Kazal-type 7) ELISA Kit人特異性巨噬武裝因子（SMAF）ELISA試劑盒,
化周期檢測點激2抗體Human MTX3(Metaxin-3) ELISA Kit人未化類胰島素生長因子結合蛋白-1ELISA試劑盒,
化周期檢測點激2抗體Human FAM151A(Protein FAM151A) ELISA Kit小鼠可溶性血管內皮蛋白C受體（sEPCR）ELISA試劑盒,
遺傳性脈絡膜缺乏癥相關蛋白抗體Human MTPAP(Poly(A) RNA polymerase, mitochondrial) ELISA Kit兔尿激型纖溶原激活物（uPA）ELISA試劑盒,
化工儀器網