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詳細(xì)介紹
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| M-07e（巨細(xì)胞白血病細(xì)胞) | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0665 |
商品介紹：
名稱 M-07e（巨細(xì)胞白血病細(xì)胞) 別稱M-07E; M-O7e; M07-e; M07e; Mo7e; MO7e; M07E; MO7E 種屬人類 年齡（性別）女性，6個(gè)月 組織來源外周血 生長特性懸浮細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài)淋巴母細(xì)胞樣 背景描述Established from the peripheral blood of a 6-month-old girl with acute megakaryoblastic leukemia (AML M7) at diagnosis in 1987; subline of the growth factor-independent cell line M-07; M-07e cells respond proliferatively to GM-CSF, IFN-alpha, IFN-beta, IFN-gamma, IL-2, IL-3, IL-4, IL-6, IL-15, NGF, SCF, TNF-alpha, TPO; we have noted that the cell line can become very quickly cytokine-independent (within 3-4 weeks), presumably due to outgrowth of independent cells. Exome and RNA sequence data are available 生物安全等級1 生長培養(yǎng)基RPMI-1640＋10% FBS＋8ng/mL GM-CSF+1% P/S 推薦傳代比例5×10^5-1×10^6cells/mL 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時(shí)間~40小時(shí) 凍存條件 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ 抗原表達(dá)情況CD3 -, CD13 +, CD14 -, CD19 -, CD33 +, HLA-DR - 注意事項(xiàng)該細(xì)胞為懸浮細(xì)胞，請注意離心收集細(xì)胞懸液；請勿直接倒掉細(xì)胞培養(yǎng)液。 |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
PTPN12 基因全長ORF克隆
ENO1 基因全長ORF克隆
CDC7 基因全長ORF克隆
NCR2 基因全長ORF克隆
MYLK2 基因全長ORF克隆
TAOK3 基因全長ORF克隆
ACTR2 轉(zhuǎn)錄變體2 基因全長ORF克隆
MAPK3 基因全長ORF克隆
PRKACA 基因全長ORF克隆
VSIG2 基因全長ORF克隆
M-07e（巨細(xì)胞白血病細(xì)胞)0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Membrane cofactor protein
0.06-4 pmol/L ELISA Kit for Human Thymidine kinase, cytosolic
TPY液體培養(yǎng)基 英文名稱：TPY Fliud Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g
SS瓊脂平板（9cm） 英文名稱：Salmonella Shigella Agar 產(chǎn)品規(guī)格：10個(gè)/包
78-5000 pg/mL 血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL 人α乙酰氨基半乳糖苷(NAGA)ELISA試劑盒
3.12-200 ng/mL 人胎盤蛋白(GD)ELISA試劑盒
0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human C-reactive protein
15.6-1000 pg/mL 人生長分化因子11(GDF11)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Vascular endothelial growth factor receptor 3
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