化工儀器網
詳細介紹
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產品屬性：
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
| 膽管癌組織源細胞 | 5×10?Cells/T25培養瓶 | GOY-01X1123 |
商品介紹：
名稱 膽管癌組織源細胞 2.組織來源：膽管癌組織 3.產品規格：5×105cells/T25細胞培養瓶 4.細胞簡介： 人膽管癌組織源細胞分離自癌組織；癌（cancer）是指起源于上皮組織的惡性腫瘤，是惡性腫瘤中最常見的一類。相對應的，起源于間葉組織的惡性腫瘤統稱為肉瘤。有少數惡性腫瘤不按上述原則命名，如腎母細胞瘤、惡性畸胎瘤等。一般人們所說的“癌癥"習慣上泛指所有惡性腫瘤。癌癥具有細胞分化和增殖異常、生長失去控制、浸潤性和轉移性等生物學特征，其發生是一個多因子、多步驟的復雜過程，分為致癌、促癌、演進三個過程，與吸煙、感染、職業暴露、環境污染、不合理膳食、遺傳因素密切相關。癌細胞，是一種變異的細胞，是產生癌癥的病源。癌細胞與正常細胞不同，有無限增殖、可轉化和易轉移三大特點，能夠無限增殖并破壞正常的細胞組織。癌細胞除了分裂失控外（能進行多極分裂），還會局部侵入周圍正常組織甚至經由體內循環系統或淋巴系統轉移到身體其他部分。分惡性和良性兩種。 5.方法簡介： 實驗室分離的癌組織源細胞采用膠原酶消化、經Percoll離心純化制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質量檢測： 實驗室分離的人膽管癌組織源細胞經檢測，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養信息： 培養基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產品貨號CM-H142 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態梭形、多角形 傳代特性可傳5代左右；3代以內狀態最佳 消化液0.25%胰蛋白酶 培養條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一、分離與培養：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
IL17A 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
大鼠 GM-CSF 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
小鼠 LIGHT / TNFSF14 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶His標簽
CD36 / SCARB3 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
BAFF / TNFSF13B 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
TGF-beta2 轉錄變體2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶His標簽
TNRC6A 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶HA標簽
PKC nu / PRKD3 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
小鼠 CLEC11A 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
小鼠 IL7 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
膽管癌組織源細胞0.312-20 ng/mL 人自噬蛋白1(BECN1)ELISA試劑盒
1.56-100 mIU/L 人胱天蛋白14(CASP14)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL 人11β羥基類固醇脫氫1型(HSD11b1) ELISA試劑盒
0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Bone morphogenetic protein 3B
0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Neuronal-specific septin-3
0.312-20 ng/mL 人Ras同系物家族成員C(Rho-related GTP-binding protein RhoC)ELISA試劑盒
15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Complement C5
15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Axin-2
31.2-2000 pg/mL 牛免疫缺陷病毒(BIV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
0.312-20 ng/mL 人FK506結合蛋白5(FKBP5)ELISA試劑盒
化工儀器網