化工儀器網
詳細介紹
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產品屬性：
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
| Super Tube (狗腎細胞) | 1×10?cells/T25培養瓶 | GOY-01X0469 |
商品介紹：
名稱 Super Tube (狗腎細胞) 別稱MDCK supertube; SuperTube 種屬狗 年齡（性別）雌性，成年 組織來源正常腎 生長特性貼壁細胞 細胞形態上皮細胞樣 背景描述從表觀正常的成年雌性可卡犬中建立了細胞株MDCK，從中克隆建立了狗上皮樣細胞株Super Tube細胞。當維持高細胞濃度時，Super Tube細胞形成大量的小管(據報道，24孔板的每孔鋪7×10^5細胞，3天內就能形成小管)。要形成小管，Super Tube細胞需要每天兩次換液以提供足夠養分。與原始細胞株相比，Super Tube細胞的c-AMP的檢測水平低得多，在毛喉素刺激下讀出的腺苷環化酶水平也低；Super Tube細胞的跨上皮抗性也比Super Dome和MDCK都低。 生物安全等級1 生長培養基DMEM/F12＋0.05mM NEAA＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:3-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液：55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ |
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實驗報告：
一、分離與培養：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
PDXK 基因全長ORF克隆
MAGEA1 基因全長ORF克隆
AKR1E2 基因全長ORF克隆
VTA1 基因全長ORF克隆
NMI 基因全長ORF克隆
PPT1 基因全長ORF克隆
PEX2 基因全長ORF克隆
TSPAN12 基因全長ORF克隆
MAD2L1BP 基因全長ORF克隆
GNPDA2 基因全長ORF克隆
Super Tube (狗腎細胞)氯、碘中和劑管（帶棉簽） 10ml*20
2 ug pAd/PL-DEST（骨架載體） pAd/PL-DEST（骨架載體） 低溫運輸，-20℃保存
SPYE肉湯 SPYE Broth 100g
600U 等離子體胺氧化 Plasma Amine Oxidase -20℃保存
10mL TBE Urea Sample Buffer,2X TBE Urea Sample Buffer,2X 常溫保存
20次 一站式His標記蛋白質微量純化套裝(超聲破碎細胞) One-Stop His-Tagged Protein Miniprep Pack 介質請于20%乙醇中4℃保存，PMSF于-20℃保存，其余試劑4℃放置
2 ug pSUPER.puro pSUPER.puro 低溫運輸，-20℃保存
化工儀器網