詳細介紹
冷凍保存細胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
產品屬性:
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
NB4(急性早幼粒細胞白血病細胞) | 1×10?cells/T25培養瓶 | GOY-01X0659 |
商品介紹:
名稱 NB4(急性早幼粒細胞白血病細胞) 別稱NB-4; NB.4 年齡(性別)女;23歲 組織來源骨髓 生長特性懸浮細胞 細胞形態淋巴母細胞樣 背景描述NB-4細胞系源自1989年第二次復發的急性早幼粒細胞白血?。?/span>APL = AML FAB M3)患者的骨髓。 生物安全等級1 生長培養基RPMI-1640+10% FBS+1% P/S 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時間~35-45 hours 凍存條件 凍存液:55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO 溫度:液氮 培養條件 氣相:空氣,95%;CO2,5% |
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養,而不適用于懸浮細胞培養,懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優質玻璃,并經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態一致的細胞,可以使用較大的培養皿,但不宜過大,以避免培養液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養:
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
CAPZB 基因全長ORF克隆
TUBB 基因全長ORF克隆
RLN1 基因全長ORF克隆
RLN2 轉錄變體1 基因全長ORF克隆
SLC30A8 基因全長ORF克隆
BAX 基因全長ORF克隆
MALT1 基因全長ORF克隆
NLGN1 基因全長ORF克隆
ASMTL 基因全長ORF克隆
HMGA1 基因全長ORF克隆
NB4(急性早幼粒細胞白血病細胞)0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Vasopressin V1b receptor
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Renin receptor
0.312-20 ng/mL 人透明質酸合成2(Hyaluronan synthase 2)ELISA試劑盒
DNA甲基綠瓊脂基礎 英文名稱:Dnase Agar Base with Methyl Green 產品規格:100
62.5-4000 pg/mL 人白介素15受體亞基alpha (IL15RA)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL 人基質金屬蛋白抑制因子4(TIMP-4)ELISA試劑盒
0.312-20 ng/mL. ELISA Kit for Human Tetraspanin-14
15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Huntingtin
改良frey氏培養基 英文名稱:Modified Frey Medium 產品規格:250g
1.56-100 U/L ELISA Kit for Human N-acetyl-beta-D-glucosaminidase