詳細介紹
冷凍保存細胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
產品屬性:
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
大鼠脊髓神經少突膠質細胞 | 5×10?Cells/T25培養瓶 | GOY-01X1371 |
商品介紹:
名稱 大鼠脊髓神經少突膠質細胞 2.組織來源:脊髓組織 3.產品規格:5×105cells/T25細胞培養瓶 4.細胞簡介: 大鼠脊髓神經少突膠質細胞分離自脊髓組織;脊髓是細細的管束狀的神經結構,位于脊柱的椎管內且被脊椎保護;是源自腦的中樞神經系統延伸部分。中樞神經系統的細胞依靠復雜的聯系來處理傳遞信息。脊髓的主要功能是傳送腦與外周之間的神經信息。人和脊椎動物中樞神經系統的一部分,在椎管里面,上端連接延髓,兩旁發出成對的神經,分布到四肢、體壁和內臟。脊髓的內部有一個H形(蝴蝶型)灰質區,主要由神經細胞構成;在灰質區周圍為白質區,主要由有髓神經纖維組成;脊髓是許多簡單反射的中樞。脊髓兩旁發出許多成對的神經(稱為脊神經)分布到全身皮膚、肌肉和內臟器官。脊髓是周圍神經與腦之間的通路,也是許多簡單反射活動的低級中樞。按脊神經的出入可把脊髓也分為相應的31節,31對脊神經就是由不同的脊椎發出的。神經膠質細胞,簡稱膠質細胞,是神經組織中除神經元以外的另一大類細胞,也有突起,但無樹突和軸突之分,廣泛分布于中樞和周圍神經系統。在哺乳類動物中,神經膠質細胞與神經元的細胞數量比例約為10:1。在中樞神經系統(CNS)中的神經膠質細胞主要有星形膠質細胞、少突膠質細胞(與前者合稱為大膠質細胞)和小膠質細胞等。傳統認為膠質細胞屬于結締組織,其作用僅是連接和支持各種神經成分,其實神經膠質還起著分配營養物質、參與修復和吞噬的作用,在形態、化學特征和胚胎起源上都不同于普通結締組織。 5.方法簡介: 實驗室分離的大鼠脊髓神經少突膠質細胞采用膠原酶-胰酶聯合消化法、神經元專用培養基培養篩選結合化學試劑抑制法制備而來,細胞總量約為5×105cells/瓶。 6.質量檢測: 實驗室分離的大鼠脊髓神經少突膠質細胞經GC(Galactocerebroside)免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養信息: 包被條件PLL(0.1mg/ml) 培養基含B-27 Supplement、PDGF-AA、bFGF、Penicillin、Streptomycin等 產品貨號CM-R238 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態梭形、多角形 傳代特性不增殖;不傳代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養條件氣相:空氣,95%;CO2,5% |
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養,而不適用于懸浮細胞培養,懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優質玻璃,并經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態一致的細胞,可以使用較大的培養皿,但不宜過大,以避免培養液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養:
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
大鼠 CD157 / BST1 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 CD157 / BST1 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 CD112 / Nectin-2 / PVRL2 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 CD79B / B29 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 KIT / c-KIT 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 CD68 / Macrosialin 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 CD24 / Ly-52 / CD24A 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 CD34 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 CD111 / Nectin-1 / PVRL1 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 XEDAR / EDA2R 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠脊髓神經少突膠質細胞Saccharomyces cerevisiae雙氫睪酮檢測試劑盒
Saccharomyces cerevisiae水通道蛋白1檢測試劑盒
Saccharomyces cerevisiae水通道蛋白2檢測試劑盒
Saccharomyces cerevisiae水通道蛋白3檢測試劑盒
Saccharomyces cerevisiae水通道蛋白4檢測試劑盒
Saccharomyces cerevisiae水通道蛋白5檢測試劑盒
Saccharomyces cerevisiae死亡受體5檢測試劑盒
Saccharomyces sp.四氫生物蝶呤檢測試劑盒