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詳細介紹
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| SW 780 [SW-780, SW780] (膀胱移行細胞癌) | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0445 |
商品介紹：
名稱 SW 780 [SW-780, SW780] (膀胱移行細胞癌) 別稱SW-780; SW 780 種屬人類 年齡（性別）女性，80歲 組織來源器官：膀胱；疾病：移行細胞癌 生長特性貼壁細胞 細胞形態(tài)上皮細胞樣 背景描述SW 780 [SW-780, SW780]是由A·Leibovitz在1974年從第一期移行細胞瘤中建立的細胞株，該患者接受過術(shù)前(Thiotepa)；報道稱SW 780 [SW-780, SW780]細胞的植板率為41%。 生物安全等級1 生長培養(yǎng)基Leibovitz's L-15＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:3-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時間~38小時 凍存條件 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，100% 溫度：37℃ 致瘤性Yes, forms tumors in nude mice. 注意事項1、該細胞推薦使用Leibovitz's L-15培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，Leibovitz's L-15不可以通入二氧化碳，會產(chǎn)生細胞毒性； 2、如您沒有無二氧化碳的培養(yǎng)箱，可使用DMEM替代Leibovitz's L-15，使用DMEM培養(yǎng)基時即可正常通入5%二氧化碳； 2、配套專用培養(yǎng)基默認Leibovitz's L-15配置，如需DMEM配方，請聯(lián)系銷售下單備注更改。 |
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
AMPH 基因全長ORF克隆
KIF2B 基因全長ORF克隆
SHCBP1 基因全長ORF克隆
NBPF15 基因全長ORF克隆
ACSBG2 基因全長ORF克隆
SH3KBP1 基因全長ORF克隆
LRWD1 基因全長ORF克隆
ENOX1 基因全長ORF克隆
EFHC1 基因全長ORF克隆
TNIP1 基因全長ORF克隆
SW 780 [SW-780, SW780] (膀胱移行細胞癌) 2 ug pET-46 Ek/LIC pET-46 Ek/LIC 低溫運輸，-20℃保存
克氏瓊脂 Kligler's Agar 250g
1瓶 A-875細胞株 A-875 低溫運輸和保存
平板計數(shù)瓊脂（PCA）顆粒 Plate Count Agar 300ml/袋*10
100次 亞硫酸鹽修飾的DNA
250mL MOPS Buffer,1.0M,pH6.0 MOPS Buffer,1.0M,pH6.0 常溫保存
250ug lambda（λ） DNA（非甲基化的cl857 Sam7） Lambda DNA（λ DNA） -20℃保存
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