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詳細(xì)介紹
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| 兔軟骨細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0835 |
商品介紹：
名稱 兔軟骨細(xì)胞 2.組織來源：軟骨組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡(jiǎn)介： 兔軟骨細(xì)胞分離自關(guān)節(jié)軟骨組織；關(guān)節(jié)軟骨屬于透明軟骨，表面光滑、呈淡藍(lán)色、有光澤，它是由一種特殊的叫做致密結(jié)締組織的膠原纖維構(gòu)成的基本框架，這種框架呈半環(huán)形，類似拱形球門，其底端緊緊附著在下面的骨質(zhì)上，上端朝向關(guān)節(jié)面，這種結(jié)構(gòu)使關(guān)節(jié)軟骨緊緊與骨結(jié)合起來而不會(huì)掉下來，同時(shí)當(dāng)受到壓力時(shí)候，還可以有少許的變形，起到緩沖壓力的作用。在這些纖維之間，散在分布著軟骨細(xì)胞，軟骨細(xì)胞由淺層向深層逐漸由扁平樣至橢圓或圓形的細(xì)胞組成，這些軟骨細(xì)胞維持關(guān)節(jié)軟骨的正常代謝。關(guān)節(jié)軟骨沒有神經(jīng)支配，也沒有血管，其營(yíng)養(yǎng)成分必須從關(guān)節(jié)液中取得，而其代謝廢物也必須排至關(guān)節(jié)液中，關(guān)節(jié)軟骨的這種營(yíng)養(yǎng)代謝必須通過關(guān)節(jié)運(yùn)動(dòng)，使關(guān)節(jié)軟骨不斷的受到壓力刺激才行，所以關(guān)節(jié)運(yùn)動(dòng)對(duì)于維持關(guān)節(jié)軟骨的正常結(jié)構(gòu)起重要的作用。關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞位于關(guān)節(jié)軟骨陷窩內(nèi)。幼稚的關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞位于關(guān)節(jié)軟骨組織的表層，單個(gè)分布、體積較小、呈橢圓形，長(zhǎng)軸與關(guān)節(jié)軟骨表面平行，越向深層的關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞體積之間增大呈圓形，細(xì)胞核圓形或卵圓形、染色淺，細(xì)胞質(zhì)弱嗜堿性，常見數(shù)量不一的脂滴。成熟的關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞多2-8個(gè)成群分布于關(guān)節(jié)軟骨陷窩內(nèi)，這些關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞由同一個(gè)母細(xì)胞分裂增殖而成，稱為同源細(xì)胞群。電鏡下，關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞有突起和皺褶，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有大量的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和發(fā)達(dá)的高爾基復(fù)合體及少量的線粒體。在組織切片中，關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞收縮為不規(guī)則形，在軟骨囊和細(xì)胞之間出現(xiàn)較大的腔隙。體外培養(yǎng)的關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞對(duì)于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。 5.方法簡(jiǎn)介： 實(shí)驗(yàn)室分離的兔關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞采用膠原酶聯(lián)合中性蛋白酶消化制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測(cè)： 實(shí)驗(yàn)室分離的兔關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞經(jīng)Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-Rb038 換液頻率每3-4天換液一次 生長(zhǎng)特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)梭形、多角形 傳代特性可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
小鼠 CLEC4D 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 CLEC4A2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 COCH 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 CDH17 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 TIMP2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 ENPP3 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 TIGIT 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 METAP1D 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 NAALADL1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 PRMT5 基因全長(zhǎng)ORF克隆
兔軟骨細(xì)胞0.625-40 U/L 人主動(dòng)脈平滑肌肌動(dòng)蛋白(Actin, aortic smooth muscle)ELISA試劑盒
0.312-20 ng/mL 人半乳糖苷3(4) 巖藻糖轉(zhuǎn)移ELISA試劑盒
改良鹽緩沖液PSB 英文名稱：Phosphate Saline Buffer,Modified 產(chǎn)品規(guī)格：250g
培養(yǎng)基Q 英文名稱：Medium Q (Columbia agar) 產(chǎn)品規(guī)格：250g
PH7.6鹽緩沖液 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：250ml*20瓶
1.56-100 nmol/L ELISA Kit for Human Metastasis-associated in colon cancer protein 1
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Matrix metalloproteinase-28
0.156-10 ng/mL 人葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3(GLUT3)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL 人腺苷脫氨CECR1(Adenosine deaminase CECR1)ELISA試劑盒
SS瓊脂顆粒 英文名稱：SS Agar 產(chǎn)品規(guī)格：300ml/袋*10
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