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詳細(xì)介紹
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1281 |
商品介紹：
名稱 脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞 2.組織來源：脂肪組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡介： 人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞分離自脂肪組織；脂肪組織主要由大量群集的脂肪細(xì)胞構(gòu)成，聚集成團(tuán)的脂肪細(xì)胞由薄層疏松結(jié)締組織分隔成小葉；貯存的脂肪，在需要時可迅速分解成甘油和脂肪酸，經(jīng)血液輸送到各組織以供利用。它們影響胰島素敏感性、血壓水平、內(nèi)皮功能、纖溶活動及炎癥反應(yīng)，參與多種重要病理生理過程；脂肪組織已由過去單純作為能量儲存的器官而成為一個極其重要的內(nèi)分泌系統(tǒng)。脂肪組織中也存在一些干細(xì)胞群，具有自我更新能力和多向分化潛能，被稱為脂肪組織來源的間充質(zhì)干細(xì)胞，簡稱脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞。與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞相比，在來源、細(xì)胞群特點以及分化潛能等多方面極為相似。但是，脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞更易獲得足夠數(shù)量的細(xì)胞，且獲取過程中對機(jī)體損傷更小，是更為理想的自體干細(xì)胞源。脂肪組織分離得到脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞以梭形為主要形態(tài)，BrdU可標(biāo)記其細(xì)胞核。 5.方法簡介： 實驗室分離的人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞采用膠原酶消化法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測： 實驗室分離的人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)CD29、CD90免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-H202 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)成纖維細(xì)胞樣 傳代特性可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
USP5 / ISOT 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
SerpinB9 / CAP-3 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
beta-Catenin / CTNNB1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
Peroxiredoxin 2 / PRDX2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 EGFL7 / VE-statin 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
STK23 / MSSK1 / SRPK3 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
PTPN2 / TC-PTP (aa 1-314) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
Midkine / MDK 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
CDC42BPB 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
RET Kinase (aa 658-1114) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞溴化亞銅 AR,99.0%二茂鐵甲 98%Anti-HO-1/HSP32/FITC 熒光素標(biāo)記血紅素氧合-1/熱休克蛋白-32抗體IgG
溴化亞銅 CP,99.0%5-氟酮 98%Anti-HO-1/HSP32/FITC 熒光素標(biāo)記血紅素氧合-1/熱休克蛋白-32抗體IgG
溴化亞銅 99.99% metals basis5-羥基 98.0%Anti-HO-2/FITC 熒光素標(biāo)記血紅素氧合-2抗體IgG
化亞銅 AR,99.5%潮霉素B 超純級Anti-HOXA10 /FITC 熒光素標(biāo)記HOXA10抗體IgG
咪唑-4，5-二羧酸 98%六羰基鎢 99.9% metals basisAnti-HOXB4/FITC 熒光素標(biāo)記HOXB4抗體IgG
2-巰基苯并咪唑 98%六羰基鎢 97%Anti-PSGD/HOXB13/FITC 熒光素標(biāo)記同源盒蛋白HOXB13抗體IgG
6-并咪唑 98%氫化 97%Anti-HOXc8/FITC 熒光素標(biāo)記同源盒基因的一種抗體IgG
胡椒基丁 95%氫化鈉 98%Anti-Hpt/HP /FITC 熒光素標(biāo)記結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白抗體IgG
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