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詳細介紹
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產品屬性：
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
| 大鼠髖臼軟骨細胞 | 5×10?Cells/T25培養瓶 | GOY-01X1417 |
商品介紹：
名稱 大鼠髖臼軟骨細胞 2.組織來源：軟骨組織 3.產品規格：5×105cells/T25細胞培養瓶 4.細胞簡介： 大鼠髖臼軟骨細胞分離自髖關節軟骨組織，髖關節是人體最大、的關節之一，是典型的球臼關節。髖關節既具有良好的內在穩定性，也具有靈活的活動性。髖臼位于髖骨外側面中央，呈半球形深凹，直徑約30~50mm，表面覆蓋厚約2mm的透明關節軟骨，呈半月形分布。中央是髖臼窩，無軟骨覆蓋，由哈佛腺充填，可以隨關節內壓力的增減擠出或者吸入關節液，以維持關節內壓力的平衡。髖臼邊緣的環形關節盂唇可以加深、加寬髖臼，使髖臼容納股骨頭的大部并處于穩定的位置，加強了髖關節的穩定性。幼稚的關節軟骨細胞位于關節軟骨組織的表層，單個分布、體積較小、呈橢圓形，長軸與關節軟骨表面平行，越向深層的關節軟骨細胞體積之間增大呈圓形，細胞核圓形或卵圓形、染色淺，細胞質弱嗜堿性，常見數量不一的脂滴。成熟的關節軟骨細胞多2-8個成群分布于關節軟骨陷窩內，這些關節軟骨細胞由同一個母細胞分裂增殖而成，稱為同源細胞群。電鏡下，關節軟骨細胞有突起和皺褶，細胞質內有大量的粗面內質網和發達的高爾基復合體及少量的線粒體。在組織切片中，關節軟骨細胞收縮為不規則形，在軟骨囊和細胞之間出現較大的腔隙。體外培養的關節軟骨細胞對于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。 5.方法簡介： 實驗室分離的大鼠髖臼軟骨細胞采用膠原酶聯合中性蛋白酶消化制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。 6.質量檢測： 實驗室分離的大鼠髖臼軟骨細胞經Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養信息： 培養基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產品貨號CM-R318 換液頻率每2-3天換液一次； 生長特性貼壁 細胞形態梭形、多角形 傳代特性可傳3代左右 消化液0.25%胰蛋白酶 培養條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一、分離與培養：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
小鼠 BAFFR / TNFRSF13C / CD268 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
F13B / Coagulation factor XIII B chain 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
食蟹猴 CXCL12 / SDF-1 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
CFD / Adipsin 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
雪貂 CD4 / Leu-3 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 PLA2G12B / PLA2G13 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 CTSL / Cathepsin-L 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
Epiregulin / EREG 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
Arginase-1 / ARG1 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 CFD / Adipsin 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠髖臼軟骨細胞對羥基苯甲酸酯 GR,99.0%5′-O-(4,4′-二甲氧基三苯甲基)胸苷 98.0%Anti-Nogo R/NGR /FITC 熒光素標記軸索過度生長抑制因子受體/Nogo受體抗體IgG
5-氯-2-(2,4-二氯苯氧基) 97%烯式酮酸 99%Anti-Nitric oxide/NO/FITC 熒光素標記一氧化氮抗體IgG
結晶紫 AR馬尿酸 98%Anti-NOS-1/bNOS/neuronal NOS/nNOS /FITC 熒光素標記一氧化氮合成-1抗體（神經型）IgG
乙二四乙酸二鈉鎂 98%1,6-二己烷 98%, 含銅屑穩定劑Anti-NOS-2/iNOS /FITC 熒光素標記一氧化氮合成-2抗體（誘導型）IgG
3-(4-吡基)-D- 98%5-己烯-1- 97%Anti-NOS-2/iNOS/FITC 熒光素標記一氧化氮合成-2抗體（誘導型）IgG
(S)-(+)-2--3-羥基-3-甲基丁酸 98%三氟磺酸 99%Anti-NuMA/FITC 熒光素標記核有絲分裂器NuMA蛋白抗體IgG
(2S,3R)-(+)-2--3-羥基-4-甲基戊酸 98%三氟磺酰氯 99%Anti-Phospho-NuMA (Ser395) /FITC 熒光素標記化核有絲分裂器NuMA蛋白抗體IgG
(S)-(-)-2--4-戊烯酸 98%死蜱 分析標準品，99%Anti-NUMB/FITC 熒光素標記膜相關蛋白Numb抗體IgG
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