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上海谷研實(shí)業(yè)有限公司 |
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| 參考價(jià) | 面議 |
更新時(shí)間：2022-04-06 09:21:14瀏覽次數(shù)：260
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | GOY-01X0135 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
| 主要用途 | 產(chǎn)品僅供科研使用 |
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| L6 (大鼠成肌細(xì)胞) | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0135 |
商品介紹：
名稱 L6 (大鼠成肌細(xì)胞) 別稱L-6; L-6 myoblast 種屬大鼠 年齡（性別）不詳 組織來源骨胳肌；成肌細(xì)胞 生長特性貼壁細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài)成肌細(xì)胞樣 背景描述L6成肌細(xì)胞是由Yaffe從甲基膽蒽存在下大鼠大腿肌的原代培養(yǎng)物最初兩代中分離得到。L6細(xì)胞在培養(yǎng)基中可融合形成多核的肌管和橫紋肌纖維。L6細(xì)胞融合的程度隨著代數(shù)的增加而下降；因而，L6細(xì)胞應(yīng)冷凍于低代次階段并周期性地重新克隆以選擇融合能力強(qiáng)的細(xì)胞。如果讓培養(yǎng)容器中的細(xì)胞長滿，L6細(xì)胞的成肌組分將迅速耗盡。 生物安全等級(jí)1 生長培養(yǎng)基DMEM＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:3-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ 基因表達(dá)情況myosin |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
去乙酰化Sirtuin-6(SIRT6/SIR2L6)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
兔子可溶性血管細(xì)胞粘附分子1(sVCAM-1)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子受體2(VEGFR-2/Flk-1)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
牛羥脂酰輔A脫氫免疫試劑盒*直銷
豬瘟抗體(IgM)免疫試劑盒*直銷
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小鼠鈣調(diào)素(CAM)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
豬熱休克蛋白40(HSP-40)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
魚乙酰酯(AChE)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
大鼠血管性血友病因子裂解(vWF-cp)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
L6 (大鼠成肌細(xì)胞)2 ug pYr-1.2-mU6-EGFP pYr-1.2-mU6-EGFP 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
50次 柱式無內(nèi)毒素質(zhì)粒DNAout Column Endo-free Plasmid DNAOUT 常溫
2 ug pEYFP-Tub pEYFP-Tub 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
采樣吸取液1-GVPC液體培養(yǎng)基添加劑 1ml*3支/管
1瓶 A2780細(xì)胞株 A2780 低溫運(yùn)輸和保存
1個(gè) 15mLDNA超濾離心管(150-250KD)
100次 總抗氧化能力檢測(cè)試劑盒（ABTS快速法） Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存
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