實驗要點(diǎn)及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品屬性:
商品介紹:
名稱 HSC-T6 (大鼠肝星形細(xì)胞) 別稱HSCT6 種屬大鼠 年齡(性別)成年 組織來源未知 生長特性貼壁細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣 生長培養(yǎng)基DMEM+10% FBS+1% P/S 推薦傳代比例1:2-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度:液氮 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5% 溫度:37℃ |
冷凍保存細(xì)胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
犬內(nèi)毒素(ET)免疫試劑盒*直銷
無花果2(FCN2)免疫試劑盒*直銷
異質(zhì)性胞核核糖核蛋白G(hnRNP G)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
小鼠S100鈣結(jié)合蛋白A8/A9復(fù)合物(S100A8/A9)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
小鼠橫紋肌輔肌動蛋白α(sm Actinin-α)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
山羊雌二醇(E2)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
小鼠肌球蛋白(MYS)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
犬粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
大鼠αL巖藻糖苷(AFU)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
鹿紅細(xì)胞膜蛋白(EMP)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
HSC-T6 (大鼠肝星形細(xì)胞)1 g HDAC抑制劑 Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存
100mL DIPSO Buffer,0.2M,pH7.0 DIPSO Buffer,0.2M,pH7.0 常溫保存
10mL 超級雜交液(Oligo探針) SuperHyb Solution for Oligo -20℃保存
250mL Anticoagulant CPDA-1 Solution(抗凝劑CPDA-1) Anticoagulant CPDA-1 Solution 常溫保存
酸性L-G培養(yǎng)基基礎(chǔ) Acid L-G Medium Base 250g
1瓶 KP-N-NS 細(xì)胞株 KP-N-NS 低溫運(yùn)輸和保存
大腸桿菌O157檢驗培養(yǎng)基