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詳細介紹
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產品屬性：
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
| NIH:OVCAR-3 [OVCAR3] (卵巢癌細胞) | 1×10?cells/T25培養瓶 | GOY-01X0177 |
商品介紹：
名稱 NIH:OVCAR-3 [OVCAR3] (卵巢癌細胞) 別稱Ovcar-3; NIH:OVCAR-3; NIH:Ovcar-3; NIH:OVCAR3; NIH-OVCAR-3; NIHOVCAR3; OVCAR.3; OVCAR3; Ovcar3 種屬人類 年齡（性別）女性，60歲 組織來源卵巢腺癌 生長特性貼壁細胞 細胞形態上皮細胞樣 背景描述NIH:OVCAR-3 [OVCAR3]細胞是由T·C·Hamilton在1982年建系，NIH:OVCAR-3 [OVCAR3]細胞取材于患進行性卵巢腺癌病人的惡性腹水。NIH:OVCAR-3 [OVCAR3]細胞與107細胞聯合皮下接種5只裸鼠21天后全部成瘤。NIH:OVCAR-3 [OVCAR3]細胞是研究卵巢癌藥物抗性的一個合適的模型系統且由于存在激素受體，這對于激素治療的評估或許是有用的。 生物安全等級1 生長培養基RPMI-1640＋20% FBS＋0.01mg/ml Insulin＋1% P/S 推薦傳代比例1:2-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時間~35-64小時 凍存條件 凍存液：55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ 致瘤性Yes, Forms colonies in soft agar. Yes, in nude mice inoculated subcutaneously with 1×10^7 cells (Tumors developed within 21 days at 100% frequency (5/5)). 受體表達情況Androgen receptor, positive; estrogen receptor, positive; progesterone receptor, positive |
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一、分離與培養：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
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NIH:OVCAR-3 [OVCAR3] (卵巢癌細胞) 1次 96孔板病毒RNAout（離心法） 96 Microwell Plate Vrial RNAOUT 4℃保存
2 ug pCMV-dR8.91 pCMV-dR8.91 低溫運輸，-20℃保存
TTC瓊脂基礎 TTC Agar Base 250g
1Mu G 鉀鹽 Penicillin G K Salt 室溫干燥保存
肝浸粉 Liver Infusion 100g
5 mg AICAR （AMPK激活劑） Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存
100mL CHES Buffer,0.5M,pH9.0 CHES Buffer,0.5M,pH9.0 常溫保存
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