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詳細介紹
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產品屬性：
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
| 兔角膜上皮細胞 | 5×10?Cells/T25培養瓶 | GOY-01X0859 |
商品介紹：
名稱 兔角膜上皮細胞 2.組織來源：角膜組織 3.產品規格：5×105cells/T25細胞培養瓶 4.細胞簡介： 兔角膜上皮細胞分離自眼角膜組織；角膜位于眼球前壁的一層透明膜，約占纖維膜的前1/6，從后面看角膜呈正圓形，從前面看為橫橢圓形。角膜厚度各部分不盡相同，中央部最薄。角膜有十分敏感的神經末梢，如有外物接觸角膜，眼瞼便會不由自主地合上以保護眼睛。為了保持透明，角膜并沒有血管，透過外界空氣、淚液及房水獲取養份及氧氣。角膜分為五層，由前向后依次為：上皮細胞層、前彈力層、基質層、后彈力層、內皮細胞層。其主要功能如下：①角膜是的無血管的組織，具有透明的特性和合成許多蛋白的功能，分三層細胞層，外層即是上皮細胞；②角膜上皮細胞能參與先天性免疫，能感應病原體存在并發出信號從而激活角膜防御系統；③角膜上皮細胞能高效表達醛脫氫酶。角膜上皮細胞的體外培養對研究角膜的生理學、病理學、免疫學以及分子生物學都是極為重要的手段，常用于研究細胞代謝產物、病毒感染、各種生長因子和藥物對細胞生長的影響。 5.方法簡介： 實驗室分離的兔角膜上皮細胞采用混合膠原酶消化結合上皮細胞專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質量檢測： 實驗室分離的兔角膜上皮細胞經PCK免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養信息： 包被條件鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） 培養基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產品貨號CM-Rb044 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態上皮細胞樣 傳代特性可傳1-3代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一、分離與培養：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
小鼠 TGFB1 基因全長ORF克隆
小鼠 SCYE1 基因全長ORF克隆
小鼠 FCER2A 基因全長ORF克隆
小鼠 CD83 基因全長ORF克隆
小鼠 TCN2 基因全長ORF克隆
小鼠 UCHL3 基因全長ORF克隆
小鼠 YWHAE 基因全長ORF克隆
小鼠 UCHL1 基因全長ORF克隆
小鼠 NOG / Noggin 基因全長ORF克隆
小鼠 CAR2 基因全長ORF克隆
兔角膜上皮細胞3.12-200 ng/mL ELISA Kit for Human Cartilage oligomeric matrix protein
脫脂奶蔗糖胰蛋白胨瓊脂 英文名稱：SkimMilkSucroseCaseinDigest Agar Medium 產品規格：250g
0.312-20 ng/mL 人β-防御素127(β-DF127)ELISA試劑盒
4.69-300 U/L 人胰腺三酰甘油脂肪(Pancreatic lipase)ELISA試劑盒
念珠菌顯色培養基 英文名稱：Candida Chromogenic Medium 產品規格：1000ml
31.2-2000 pg/mL 人胃脂肪(LIPF)ELISA試劑盒
1.56-100 pmol/mL ELISA Kit for Human Titin
15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Annexin A1
0.312-20 ng/mL 人胰島素樣蛋白3(INSL-3)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL 人的載脂蛋白D(APOD)ELISA試劑盒
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