化工儀器網(wǎng)
詳細介紹
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 胃癌組織成纖維細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1293 |
商品介紹：
名稱 胃癌組織成纖維細胞 2.組織來源：胃癌組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 人胃癌組織源成纖維細胞分離自患有胃癌病人的胃癌組織；胃癌（gastric carcinoma）是起源于胃黏膜上皮的惡性腫瘤，在我國各種惡性腫瘤中發(fā)病率居，胃癌可發(fā)生于胃的任何部位，其中半數(shù)以上發(fā)生于胃竇部，胃大彎、胃小彎及前后壁均可受累，絕大多數(shù)胃癌屬于腺癌。在胃癌侵襲和轉移的過程中，涉及諸多復雜的過程，如細胞外基質(zhì)的硬化和降解、新生血管的形成等，而這些過程會直接或間接的引起腫瘤微環(huán)境（Tumor mircoenvironment）的改變。腫瘤微環(huán)境即腫瘤細胞生存的外部環(huán)境，由不同種類的非腫瘤性的細胞與細胞外基質(zhì)（Extracellular matrix，ECM）構成，包括纖維細胞，免疫細胞，內(nèi)皮細胞，間充質(zhì)干細胞等，腫瘤細胞通過調(diào)控這些間質(zhì)細胞，創(chuàng)造出有利于自身侵襲轉移的條件，從而使得腫瘤得到進展。越來越多的證據(jù)表明，腫瘤微環(huán)境的改變在腫瘤進展中扮演著重要的角色。在腫瘤微環(huán)境中，研究最多也是最主要的間質(zhì)細胞是腫瘤相關成纖維細胞（cancer-associated fibroblasts, CAFs）。CAFs 主要由腫瘤周邊的正常成纖維細胞和成纖維細胞樣細胞演化而來。胃癌組織源成纖維細胞多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。剛分離的胃癌組織源成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細胞基本貼壁*，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質(zhì)透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。 5.方法簡介： 實驗室分離的人胃癌組織成纖維細胞采用混合膠原酶消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測： 實驗室分離的人胃癌組織成纖維細胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-H206 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)成纖維細胞樣 傳代特性可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
Lck Kinase 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
CCNA1 / Cyclin-A1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
甲型流感 H1N1 核蛋白 (Nucleoprotein / NP) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
S100A9 / CAGB / p14 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
S100A8 / CAGA / p8 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
TGM2 / Transglutaminase 2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
CNTFR / CNTFR-alpha 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
ACBD6 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
MAP1D / Methionine Aminopeptidase 1D 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
S100A6 / CACY 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
胃癌組織成纖維細胞CD318抗體Human SAT1(Diamine acetyltransferase 1) ELISA Kit三糖鐵瓊脂（TSI）
著絲粒蛋白B抗體Human SH3BP2(SH3 Domain Binding Protein 2) ELISA Kit產(chǎn)芽孢肉湯 用于產(chǎn)氣莢膜梭的產(chǎn)芽孢培養(yǎng)
1號染色體開放閱讀框111抗體Human IFNA2(Inteferon alpha 2a) ELISA Kit皰肉牛肉粒 加入皰肉基礎中，配成皰肉培養(yǎng)基
19號染色體開放閱讀框80抗體Human NENF(Neudesin) ELISA KitCBZ-L-焦谷
半胱雙加氧1抗體Human SCUBE2(Signal peptide, CUB and EGF-like domain-containing protein 2) ELISA KitBOC-L-天冬酰
膠原蛋白11A2抗體Human beta 1-ARA(beta 1 adrenergic receptor autoantibody) ELISA Kit芴甲氧羰基-O-叔丁基-L-
CUL4B蛋白抗體Human Wnt6(Protein Wnt-6) ELISA Kit大豆苷 Daidzin
1號染色體開放閱讀框103抗體Human NEXN(Nexilin) ELISA Kit鉤吻素子 Koumine
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