詳細介紹
冷凍保存細胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
SW1116 (結(jié)腸腺癌細胞) | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0305 |
商品介紹:
名稱 SW1116 (結(jié)腸腺癌細胞) 別稱SW-1116; SW 1116 種屬人類 年齡(性別)男性,73歲 組織來源結(jié)腸腺癌Ⅲ期 生長特性貼壁細胞 細胞形態(tài)上皮細胞樣 背景描述SW1116細胞CSAp陰性(CSAp-)、結(jié)腸抗原3陰性;SW1116細胞角蛋白免疫過氧化物酶染色陽性。癌基因檢測表明,SW1116細胞c-myc、K-ras、H-ras、myb、sis和fos的表達呈陽性,未檢測到癌基因N-myc和N-ras的表達。SW1116還表達腫瘤特異的核基質(zhì)蛋白CC-4、CC-5和CC-6。 生物安全等級1 生長培養(yǎng)基Leibovitz's L-15+10% FBS+1% P/S 推薦傳代比例1:3-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時間~96-144小時 凍存條件 凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度:液氮 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,100% 溫度:37℃ 致瘤性Yes, in nude mice. 抗原表達情況Blood Type O, Rh+ 基因表達情況carcinoembryonic antigen (CEA) 2654 ng/10^6 cells/10 days; keratin 注意事項1、該細胞推薦使用Leibovitz's L-15培養(yǎng)基進行培養(yǎng),Leibovitz's L-15不可以通入二氧化碳,會產(chǎn)生細胞毒性; 2、如您沒有無二氧化碳的培養(yǎng)箱,可使用DMEM替代Leibovitz's L-15,使用DMEM培養(yǎng)基時即可正常通入5%二氧化碳; 2、配套專用培養(yǎng)基默認Leibovitz's L-15配置,如需DMEM配方,請聯(lián)系銷售下單備注更改。 |
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
ICE蛋白激活因子(IRAP)免疫試劑盒進口、組裝
抗IgE受體抗體免疫試劑盒進口、組裝
左旋肉堿/L-肉堿 免疫試劑盒進口、分裝
化蛋白激B(P-PKB)免疫試劑盒進口、分裝
大鼠Ⅲ型前膠原(HPCⅢ)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應
轉(zhuǎn)錄因子抗體-1(ATF-1)免疫試劑盒進口、組裝
兔子前列腺素A1 免疫試劑盒進口、分裝
豬紅細胞生成素(EPO)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應
小鼠羧化不全骨鈣素(ucOC)免疫試劑盒進口、分裝
豬戊糖素(PE)免疫試劑盒進口、分裝
SW1116 (結(jié)腸腺癌細胞) 礦物鹽瓊脂 Mineral Salts Agar 250g
100mL β- 巰基乙醇 β-Mercaptoethanol 室溫避光保存
50T 腦膜炎細菌多重PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存
1 g 5-FITC Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
100mL Bis-Tris Propane,0.2M,pH7.4 Bis-Tris Propane,0.2M,pH7.4 常溫保存
50次 脈沖電泳Marker(酵母染色體PFG)
50T 埃博拉病毒PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存