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elisa酶聯(lián)免疫試劑盒說明書重復性差的解決方法
閱讀:374 發(fā)布時間:2017-6-21elisa酶聯(lián)免疫試劑盒說明書是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關(guān)系。
1、樣品數(shù)量不一,加樣時間長短不一。elisa酶聯(lián)免疫試劑盒說明書解決方法:重復某一樣品時,加樣時間盡可能與*次接近。
2、樣品加入后未混勻。解決方法:加樣后在混勻器上充分混勻。
3、酶標儀濾光片不對或輸入波長不對。解決方法:TMB顯色用450/630波長。
4、酶標儀測定重復性差。解決方法:校對酶標儀。
5、洗滌不正確。解決方法:洗滌液注滿各孔但不要溢出。洗板時反應(yīng)板面向下,垂直用力甩凈內(nèi)容物(可多甩幾次),在干凈、無或少塵的吸水材料上拍干。洗板機洗板時不應(yīng)有堵孔,洗滌應(yīng)充分。
6、溫育條件不一致(一次用水育,一次用恒溫箱)。elisa酶聯(lián)免疫試劑盒說明書解決方法:恒溫箱溫育較水浴顯色深, OD值高出0.1-0.15,均采用恒溫箱.如用水浴水溫應(yīng)控制在37℃。