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1,用特殊的微孔板作為測定板,大鼠ELISA試劑盒用親和素包被微孔板,然后用生物素標記探針的3端,再通過該生物素和包被在微孔板上的親和素發生連接,將探針固定在微孔板上,形成一個固相捕獲系統.注意:探針5端和待檢靶序列5端的一段要互補.
2,在擴增時,引物用抗原(生物素,地的高辛或熒光素酶等)標記,這樣擴增產物中就會滲入抗原.
3,PCR擴增產物與微孔板上的探針雜交,從而捕獲被測靶序列,由于擴增產物中已經滲入抗原,在微孔中加入HRP標記抗體后,酶標抗體就與靶序列的抗原免疫結合,zui后加入酶底物進行酶促顯色,大鼠ELISA試劑盒通過光密度測定實現定量.
    PCR-ELISA比PCR本身在病毒分型,基因多態性分析與克隆鑒定等方面有其*的優勢.另外,不應用同位素標記,因而避免了放射性帶來的危害,而且整個實驗周期僅需6h左右,較Southern blot雜交大為縮短實驗時間,操作簡便,可用于大量標本的檢測.盡管與熒光素染色凝膠電泳相比較,PCR-ELISA檢測結果的特異性,靈敏性和準確性有顯著的提高,但是ELISA試劑盒基本上是一個開放性的反應系統,特別是在洗滌elisa酶聯免疫試劑盒價格反應板時,很容易造成污染,從而引起假陽性.因此,在PCR-ELISA整個實驗過程中,必須進行嚴格的無菌操作.同是,PCR-ELISA對PCR產物和探針的雜交條件(PCR產物的稀釋度,雜交溫度和時間)要求嚴格.
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