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大鼠血小板生成素(TPO)ELISA試劑盒使用說明書

閱讀:110          發布時間:2017-6-8
提 供 商 上海谷研實業有限公司 資料大小 75.6KB
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大鼠血小板生成素(TPO)ELISA試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA).已知Apelin-17濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將Apelin-17和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中Apelin-17的濃度呈比例關系。
安全性
1、避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
2、實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3、不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
樣品收集、處理及保存方法
1、血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2、血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液
5、保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
大鼠血小板生成素(TPO)ELISA試劑盒操作步驟
1、使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。
2、根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應孔內。
3、加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
4、甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
5、每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
6、甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
7、每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
8、取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
9、在450nm波長處測定各孔的OD值。
結 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的Apelin-17標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的Apelin-17含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。
3、檢測值范圍:0-80ng/ml
4、大鼠血小板生成素(TPO)ELISA試劑盒敏感度: 0.1 ng/ml

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