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人參源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒通用原則:

1, 先選擇好探針,然后設計引物使其盡可能的靠近于探針。

2, 擴增子的長度應不超過400bp,理想的*能在100-150bp內(nèi),擴增片斷約短,有效的擴增反應就越容易獲得。較短的擴增片斷也容易保證分析的一致性

3, 保持GC含量在20%和80%之間,GC富含區(qū)容易產(chǎn)生非特異反應,從而會導致擴增效率的降低,及在SG分析中非特異信號。

4, 為了保證效率和重復性,應避免重復的核苷酸序列,尤其是G(不能有4個連續(xù)的G)

5, 將引物和探針互相進行配對檢測,以避免二聚體和發(fā)卡結構的形成。

b),探針設計指導

1,在設計引物之前設計探針

2,探針的Tm值應在68-70℃之間,如果是目測探針,則要仔細審查GC富含區(qū)。

3,探針的5’端要避免有鳥氨酸,5’G會有淬滅作用,即使被切割下來這種淬滅作用也還會存在

4,選擇C多于G的鏈作探針,G的含量多于C會降低反應效率,這時就應選擇配對的另一條鏈作為探針。

6, 探針應盡可能的短,不要超過30個bp。

7, 檢測探針的DNA折疊和二級結構。

B16-F10, 小鼠黑色素瘤高轉移細胞

SGC-7901, 人胃腺癌細胞系

SK-N-SH, 人神經(jīng)母細胞瘤細胞

SK-MEL-1, 人皮膚黑色素瘤細胞

A549, 人肺癌細胞系

SKOV3/Taxol-25, 人卵巢癌紫杉醇耐藥細胞株

A-375 [A375], 人惡性黑素瘤細胞株

A549/DDP, 人肺腺癌耐藥細胞株

SP2/0, 小鼠骨髓瘤細胞

WM35, 人黑色素瘤細胞

BxPC-3, 人原位胰腺腺癌細胞株

U-2 OS, 人骨肉瘤細胞

WM451, 人黑色素瘤細胞

SW 1990 [SW-1990, SW1990] , 人胰腺癌細胞

C6, 大鼠腦膠質瘤細胞

UM-UC-3, 人膀胱移行細胞癌

Hela, 人宮頸癌細胞系

HNE2, 人鼻咽癌細胞系

SKOV3 [SK-OV-3], 人卵巢癌腺癌細胞系

786-O [786-0], 人腎透明腺癌細胞

HEC-1A, 人子宮內(nèi)膜癌細胞系

Caki-1, 人腎透明細胞癌皮膚轉移細胞

Ishikawa, 人子宮內(nèi)膜癌細胞系

ACHN, 人腎細胞腺癌細胞

JEC, 人子宮內(nèi)膜腺癌細胞系

BPH-1, 人前列腺增生細胞

RL95-2, 人子宮內(nèi)膜腺癌細胞系

Ca Ski, 人宮頸癌細胞

MCF-7 [MCF7], 人乳腺癌細胞系

Raw264.7, 小鼠單核巨噬細胞白血病細胞