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小鼠β防御素elisa檢測試劑盒試劑配制:

1、小鼠β防御素elisa檢測試劑盒說明書酶聯(lián)板（Assay plate ）：一塊（96孔或者48孔）。

2、標(biāo)準(zhǔn)品（Standard）：2瓶（凍干品）。

3、樣品稀釋液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。

4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。

5、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。

6、生物素標(biāo)記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）

7、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）

8、底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。

9、濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。

10、終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

【實(shí)驗(yàn)用途】β-Defensin，β－防御素。β-Defensin是一種富含半胱氨酸陽離子多肽，含有 6個(gè)穩(wěn)定的半胱氨酸，分別以 l－6，2－4，3一5連接形成三個(gè)分子的二硫鍵，構(gòu)成穩(wěn)定的反相平行的三股β一片層結(jié)構(gòu)。二流鍵可以使小分子防御素緊密聯(lián)結(jié)以防御蛋白酶水解，所以在富含蛋白的吞噬溶酶體環(huán)境中仍能保持其特性，這也是防御素區(qū)別與其他抗微生物肽的主要因素。pBD－1除上述結(jié)構(gòu)外，還含有2個(gè)精氨酸、7個(gè)賴氨酸，且在成熟的肽中不含有陰離子殘基。預(yù)先包被的β-Defensin（β－防御素）抗體為多克隆β-Defensin（β－防御素）抗體。檢測相β-Defensin（β－防御素）抗體也為多克隆β-Defensin（β－防御素）抗體，經(jīng)生物素（biotin）標(biāo)記。樣品和生物素標(biāo)記β-Defensin（β－防御素）抗體先后加入酶標(biāo)板孔反應(yīng)后，PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標(biāo)記的親和素反應(yīng)；經(jīng)過PBS或TBS的*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測因子呈正相關(guān)。

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