在多重熒光免疫組化(mIHC)實驗中，選擇正確的一抗至關重要，但實驗中一些常被忽視的小步驟，如抗體稀釋液的選擇，實際上對實驗成敗起著決定性作用。本文將探討如何通過選擇合適的抗體稀釋液來優化mIHC結果。
抗體稀釋液不僅影響抗體與靶標的特異性相互作用，還影響抗體的穩定性。常用的稀釋液包括PBST、TBST、PBS和TBS等。了解它們的區別對于精準選擇至關重要。
緩沖液成分對比
緩沖液 | 組成成分 |
PBST | Na2HPO4, KH2PO4, NaCl, KCl, Tween-20 |
PBS | Na2HPO4, KH2PO4, NaCl, KCl |
TBS | NaCl, KCl, Tris-base |
TBST | NaCl, KCl, Tris-base, Tween-20 |
1）PBS：基于磷酸鹽的緩沖體系，pH穩定性好，但可能與重金屬離子形成沉淀，影響部分生化反應。
2）TBS：基于Tris-base的緩沖體系，對生化反應的干擾小，但pH易受環境和稀釋倍數影響。
Tween-20是一種非離子型表面活性劑，能增加抗體與組織的接觸面積，提高抗體的復性抗原能力，從而增強特異性結合。
1）PBS：適用于大多數實驗場景，包括洗滌和培養。
2）TBS：對抗體的干擾小，適合作為抗體稀釋液。
3）TBST：含有Tween-20，適合作為mIHC實驗中的抗體稀釋液。
封閉試劑，如與二抗同一來源的封閉血清或BSA，可以減少非特異性結合，提高抗體的特異性。如愛必信的多色試劑盒的二抗種屬來源就是山羊，那么就可以用愛必信的山羊血清（貨號：abs933）作為封閉劑。
選擇合適的抗體稀釋液對于獲得wan美的mIHC結果至關重要。如果您的mIHC結果不盡如人意，建議嘗試更換抗體稀釋液以優化實驗結果。
多色常用試劑推薦：
分類 | 貨號 | 產品名稱 | 規格 |
固定 | abs9179 | 4%多聚甲醛(通用型組織固定液) | 500mL |
包埋(冰凍樣本) | abs9756 | OCT包埋劑 | 110mL |
抗原修復(石蠟切片) | abs9342 | Tris-EDTA抗原修復液(10×,pH9.0) | 100mL |
abs9248 | 檸檬酸鈉抗原修復液(50×) | 100mL | |
抗體洗脫(無法采用熱修復進行洗脫的樣本，如細胞、冰凍、骨組織等) | abs994 | 抗體洗脫液(mIHC專用) | 30mL |
細胞通透(胞內指標需要) | abs9149 | 曲拉通X-100 | 100mL |
淬滅內源性過氧化物酶 | abs9333 | 過氧化物酶封閉液(H2O2法) | 100mL |
免疫組化筆 | abs929 | 免疫組化筆plus:abs9785(蠟性) | 1支 |
封閉(二抗同來源血清) | abs933 | 山羊血清 | 50mL |
abs9157 | 牛血清白蛋白 | 100g | |
抗體稀釋液 | abs9299 | 一抗二抗稀釋液 | 100mL |
緩沖液 | abs952 | TBST(10×) | 500mL×2 |
abs9340 | PBST(1×,pH7.4) | 500mL |
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