詳細介紹
產品名稱:貓腎細胞;CRFK
規格:1×10?cells/T25培養瓶
貨號:YS-02X9579
細胞生長實驗 :細胞生長良好,形態正常
儲存條件:2℃-8℃,避光儲存
運輸條件:冰袋冷藏運輸
公司產品僅用于科研
細胞培養步驟
一.培養基及培養凍存條件準備:
1) 準備RPMI-1640 培養基;優質胎牛血清,10%;Glutamax(invitrogen 35050061),1%;Sodium pyruvate(invitrogen 11360070),1%;雙抗,1%。
2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入250px皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
注意事項:
(1)凍存前細胞狀態,細胞最好在對數生長期,細胞密度適合,剛剛發生細胞融合,過密或連成片的細胞狀態不好,而且消化時不容易分散;
(2)凍存的密度不宜過低,10的6次方-7次方的數量級比較好,我凍存的細胞一般T25培養瓶(5*107),一瓶凍一管(1.5ml凍存管),10cm培養皿(大概10的8次方個細胞)分成兩管。
(3)消化和吹打,切忌胰酶消化過度,吹打不可太用力,最好不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養基吹打哦,不是加入凍存液再吹打。
(4)離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對于腫瘤細胞株而言要求不是很嚴格,我從10%-90%都用過,問題不大,個人認為10%-20%可以了,能節約處就節約點嘛!另外,凍存液可以在處理細胞前配置,放在4度冰箱預冷。細胞離心后直接用預冷的凍存液重懸,移入凍存管。
(5)關于“慢凍",傳統的方法,LLC細胞凍存管用棉花包好,4度2h,-20度2h或更長,-80度過夜,最后液氮。對于條件較好的實驗室和細胞凍存數量多的實驗室,推薦使用程序降溫盒,內裝異丙醇,在-80度并內可以逐漸降溫,很方便,省了包棉花、4度、-20度了。
使用步驟:
一)準確稱量試劑:根據不同的菌類和用途,選擇適宜的培養基,培養基所需試劑必須純凈。
(二)校正pH值:將稱量好的培養基各種成分放入容器內,標記劃線,加熱溶解,補充水分,測定酸堿度,常用pH6.8~8.0的精密試紙或酸度計測定。用1N NaOH和1N HCl調節pH值到適宜范圍內。
(三)過濾:將玻璃漏斗置鐵架上,再用人子宮成纖維細胞*培養基紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中,將上述培養基倒入其中過濾至透明。
(四)分裝:將過濾后的培養基分裝于中試管或三角瓶內(試管內每支裝5mL;三角瓶中裝100~150ml),塞好棉塞用牛皮紙包扎好,準備滅菌。
(五)滅菌:培養基的滅菌,常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營養細胞在水中煮沸后即被殺死,但細菌的芽胞有較強的抗熱性,須經高壓蒸汽滅菌才能達到*滅菌的目的。根據蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理,即壓力越大,蒸汽溫度就越高。因此,在同一溫度條件下,采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。而且在濕熱情況下,菌體吸收水分后,其蛋白質易于凝固變性,因為蒸汽的穿透力強,殺菌效果好。
細胞特性:
1)】組織來源于實驗動物的正常眼組織。
2)細胞鑒定:細胞免疫熒光染色為陽性。
3)經鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。
5)細胞生長方式:上皮樣,不規則細胞,貼壁培養。
Plectin/FITC 熒光素標記網蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Rat IgG (親和純化) 大鼠IgGMulti-class antibodies規格: 1mg
高遷移率族蛋白-1抗體 HMGB1 0.1ml
Goat Guinea pig IgG 羊抗豚鼠IgG 1mg
FGF8 英文名稱: 成纖維細胞生長因子8抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Phospho-RelB(Ser573) 磷酸化核轉錄因子NFKB-RelB蛋白抗體 規格 0.1ml
Rat IgG (親和純化) 大鼠IgGMulti-class antibodies規格: 1mg
HSP-90 Alpha(Heat Shock Protein 90 Alpha ) 熱休克蛋白90α抗體Multi-class antibodies規格: 0.5mg
phospho-c-Abl(Tyr204) 磷酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh phospho-CHEK1 (Ser280) 磷酸化細胞周期檢測點激酶1抗體 規格 0.1ml
兔抗豬IgG血清 0.5ml 國產
Wnt11 英文名稱: 信號通路Wnt11抗體 0.1ml
Phospho-Doublecortin (Ser128) 英文名稱: 磷酸化雙皮質素抗體 0.1ml
phospho-c-Abl(Tyr204) 磷酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml
synaptotagmin-2 英文名稱: 突觸結合蛋白相關基因2抗體 0.1ml
phospho-MEK1 + MEK2 (Ser222 + Ser226) 英文名稱: 磷酸化原活化蛋白激酶1抗體 0.1ml
CD3抗體 CD3 0.1ml
VDCC-L Beta/FITC 熒光素標記L-型電壓依賴型鈣通道β抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-GSK3 alpha(Ser21) 磷酸化葡萄糖合成激酶3α抗體 GSK3α(Phospho-Ser21) 規格 0.1ml
CD62L (ELAM-1/L-Selectin ) L選擇素抗原Multi-class antibodies規格: 0.5mg
貓腎細胞;CRFK巖藻糖;L-巖藻糖卷柏(墊狀卷柏)PH4-5顯色(BROMOCRESOL GREEN)指示溶液
果膠酶麥芽PH5-6顯色(CHLOROPHENOL RED)指示溶液
β-淀粉酶(70萬u/ml液體)花椒PH6-7顯色(BROMOTHYMOL BLUE)指示溶液
β-淀粉酶(酶活5萬粉末)蘆根PH7-8顯色(PHENOL RED)指示溶液
DNA酶,脫氧核糖核酸酶Ⅰ扶芳藤PH8-9顯色(THYMOL BLUE)指示溶液
高峰淀粉酶來源于米曲霉(4000U/g)伸筋草PH9-10顯色(THYMOLPHTHALEIN)指示溶液
高峰淀粉酶來源于米曲霉(100U/mg )雞冠花P11-12顯色(SULFO ORANGE)指示溶液
甘油-3-磷酸脫氫酶苦楝皮(楝)線蟲繁殖培養試劑盒