詳細介紹
實驗過程:
一、溶血性曼氏桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒試劑準備
1. DNA模板
2.產品僅用于科研對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
參數規格:
產品名稱:溶血性曼氏桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱:Mannheimia haemolytica
產品規格:50T
產品運輸:低溫運輸
產品保存:-20℃保存
產品有效期:一年
產品特點:本產品就是根據保守區設計引物而開發的高靈敏熒光定量 PCR 產品。
運輸及保存
低溫運輸,-20℃保存,保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX(根據機型決定,具體見使用方法)。
本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
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產品及特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據鮑皰疹樣病毒探針法熒光定量保守序列設計的專一性引物,與相關病毒無交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量PCR檢測,避免后續污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應體系的熒光定量PCR。
以下是公司正在熱銷的產品:
非模式菌ADAMTS2 Polyclonal Antibody英文名稱: Anti-CD22 Polyclonal Antibody宿主: Rabbit分子式:C18H19NO5性狀:Powder純度:97.0%
Anti-ADAMTS5 Polyclonal Antibody英文名稱: Anti-CRABP2 Polyclonal Antibody宿主: Rabbit分子式:C19H22N2O3性狀:Powder純度:97.5%
Anti-ADAMTS5 Polyclonal Antibody英文名稱: Anti-PCNA Polyclonal Antibody宿主: Rabbit分子式:C17H17NO4性狀:Powder純度:98.0%
Anti-ADAMTS7 Polyclonal Antibody英文名稱: Anti-MKI67 Polyclonal Antibody宿主: Rabbit分子式:性狀:C20H19N2O3純度:97.5%
Anti-ADAMTS9 Polyclonal Antibody英文名稱: Anti-GNA11 Polyclonal Antibody宿主: Rabbit分子式:C19H21NO5性狀:Powder純度:97.0%
Anti-ADAMTSL2 Polyclonal Antibody英文名稱: Anti-BGLAP Polyclonal Antibody宿主: 分子式:C21H24N2O3性狀:Powder純度:98.0% Anatabine特異性: 大鼠、小鼠Bax mRNA原位雜交試劑盒
Ditryptophenaline特異性: 人、大鼠、小鼠Bcl-X mRNA原位雜交試劑盒
Tyramine特異性: 人、大鼠、小鼠Bak mRNA原位雜交試劑盒
Lucidioline特異性: 人BCB1 mRNA原位雜交試劑盒
Coulteropine特異性: 人、大鼠、小鼠Bcl-X/L mRNA原位雜交試劑盒
Victoxinine特異性: 人、大鼠、小鼠BDNF mRNA原位雜交試劑盒
Arborinine特異性: 人BCYRN1/Aliases mRNA原位雜交試劑盒
Anti-ADAP1 Polyclonal Antibody英文名稱: Anti-PTGES2 Polyclonal Antibody宿主: Rabbit分子式:C13H11NO性狀:Powder純度:%
Anti-ADAR Polyclonal Antibody英文名稱: Anti-ARNTL Polyclonal Antibody宿主: Rabbit分子式:C13H9NO3性狀:Yellow powder純度:97.5%
Anti-ADAR Polyclonal Antibody英文名稱: Anti-BID Polyclonal Antibody宿主: Rabbit分子式:C13H9NO2性狀:Yellow powder純度:97.0%
Anti-ADCY1 Polyclonal Antibody英文名稱: Anti-HLA-DRA Polyclonal Antibody宿主: Rabbit分子式:C18H17NO2性狀:Yellow powder純度:%
Anti-ADCY1 Polyclonal Antibody英文名稱: Anti-NFKB2 Polyclonal Antibody宿主: Rabbit分子式:C28H34N2O7性狀:Powder純度:96.5%
Anti-ADCY2 Polyclonal Antibody英文名稱: Anti-NR2D Polyclonal Antibody宿主: Rabbit分子式:C14H11NO3性狀:Yellow powder純度:%
Anti-ADCY3 Polyclonal Antibody英文名稱: Anti-GSDMB Polyclonal Antibody宿主: Rabbit分子式:C21H20N2O3性狀:Yellow powder純度:%
Anti-ADCYAP1R1 Polyclonal Antibody宿主: Rabbit英文名稱: Anti-DIABLO Polyclonal Antibody分子式:C23H21NO5性狀:Yellow powder純度:99.0%
Anti-ADD1 Polyclonal Antibody英文名稱: Anti-FABPB Polyclonal Antibody宿主: Rabbit分子式:C10H9NO3性狀:Oil純度:%
Anti-ADD1 Polyclonal Antibody英文名稱: Anti-KRT18 Polyclonal Antibody宿主: Rabbit分子式:C26H30N2O8性狀:Powder純度:98.5%
Anti-ADGRG1 Polyclonal Antibody英文名稱: Anti-BSA Polyclonal Antibody宿主: Rabbit分子式:C20H23NO4性狀:Yellow powder純度:98.5%
Anti-ADH1A Polyclonal Antibody英文名稱: Anti-SCAMP1 Polyclonal Antibody宿主: Rabbit分子式:C10H11NO性狀:Powder純度:%
Anti-ADH1B Polyclonal Antibody英文名稱: Anti-HMOX1 Polyclonal Antibody宿主: Rabbit分子式:C4H7NO2性狀:Powder純度:98.0%
Anti-ADH1C Polyclonal Antibody英文名稱: Anti-FLNA Polyclonal Antibody宿主: Rabbit分子式:C8H7NO3性狀:Powder純度:98.0%
Anti-ADH4 Polyclonal Antibody英文名稱: Anti-GIF Polyclonal Antibody宿主: Rabbit分子式:C19H24N2O2性狀:Powder純度:96.0%
Anti-ADH5 Polyclonal Antibody英文名稱: Anti-FLNB Polyclonal Antibody宿主: Rabbit分子式:C19H24N2O3性狀:Powder純度:98.0%
Anti-ADH7 Polyclonal Antibody英文名稱: Anti-TNFSF10 Polyclonal Antibody宿主: Rabbit分子式:C9H11NO3性狀:Powder純度:%
Anti-ADIPOQ Polyclonal Antibody英文名稱: Streptavidin/AP應用: WB=1:500-5W;ELISA=1:5000-50W;IHC-P=1:500-5W;IHC-F=1:500-5W;not yet tested in other applications.optimal dilutions/concentrations should be ?囊菌類酵母菌。阿城糖蜜酵母;甜菜糖蜜酒精酵母
溶血性曼氏桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒KV12.3(Elk3)抗體(50ul) Anti-KV12.3 (Elk3)
KV12.3(Elk3)抗體(0.2ml) Anti-KV12.3 (Elk3)
KV12.1(Elk1)抗體(50ul) Anti-KV12.1 (Elk1)
KV12.1(Elk1)抗體(0.2ml) Anti-KV12.1 (Elk1)
KV11.3(erg3)抗體(0.2ml) Anti-KV11.3 (erg3)
KV11.3(erg3)抗體(50ul) Anti-KV11.3 (erg3)
KV11.2(erg2)抗體(50ul) Anti-KV11.2 (erg2)
KV11.2(erg2)抗體(0.2ml) Anti-KV11.2 (erg2)
KV11.1(胞外)-FITC抗體(50ul) Anti-KV11.1 (extracellular)-FITC
使用方法:
一、稀釋PCR陽性對照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的DN段作為陽性對照。
2. 標記6個離心管,分別為7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品,必須設置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)。可以用10μL上步制備的PCR陽性對照的第4號(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當于1萬拷貝)或第5號(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設置qPCR反應(20 μL體系,在樣品制備室進行)
10. 如果只做1次重復,則標記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照,6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復,則反應設置數量相應增加2或3倍。
11. 在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好。