牛分枝桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。

【產(chǎn)品名稱】牛分枝桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒
【英文名稱】Mycobacterium bovis
【產(chǎn)品編號】YSP6949
【包裝規(guī)格】50T
【預(yù)期用途】
產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品可用于肉及肉制品中鴨源性成分的定性檢測，所用儀器為實(shí)時熒光PCR儀，可通過實(shí)時擴(kuò)增曲線判斷樣品中是否存在鴨源性成分。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒采用實(shí)時熒光PCR技術(shù)，針對鴨源性成分核酸序列設(shè)計(jì)特異性引物和熒光探針，通過實(shí)時熒光一步法RT-PCR（Taqman探針法）對鴨源性成分核酸進(jìn)行定性檢測。
*的擴(kuò)增性能:
高性能的UNICONTM Taq DNA聚合酶及優(yōu)化的反應(yīng)體系保證更高的擴(kuò)增效率。以相同量的293T細(xì)胞cDNA為模板，擴(kuò)增β-actin基因，與同類產(chǎn)品相比，UNICONTM qPCR Master Mix擴(kuò)增信號更強(qiáng)，擴(kuò)增效率更高。
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PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：
牛分枝桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

循環(huán)步驟	溫度	時間	循環(huán)數(shù)
預(yù)變性	94℃	5   min	1
變性	94℃	10   sec	30-40
退火	50-65℃	20   sec	30-40
延伸	72℃	30   sec/kb	30-40
終延伸	72℃	5   min	1

實(shí)驗(yàn)步驟：
典型的PCR由
（1）高溫變性模板；
（2）引物與模板退火；
（3）引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個循環(huán)，通過多次循環(huán)反應(yīng)，使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其要步驟是：
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈；
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合，兩個引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長短；
耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入，以目的基因?yàn)槟０鍙?’→3’方向延伸，合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
97%500g25g異阿魏2807309Ring Finger Protein 18

柯伊利素-7-O-葡萄糖苷,野決明苷 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥97%，標(biāo)準(zhǔn)品 Chrysoeriol 7-O-glucoside

AstragalosideⅡ沙丁醇相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格：規(guī)格：人垂體腺苷環(huán)化酶激活肽（ PACAP）Polyclonal Antibody 0.2ml

人的血管內(nèi)皮細(xì)胞生長子受體2(VEGFR2)Fbxw7/CDC4  Fbxw7蛋白抗體規(guī)格:96T/48TAlclometasone Dipropionate規(guī)格:50mgBPDEDNA加合物檢測試盒20mg人肺癌細(xì)胞(淋結(jié)轉(zhuǎn)移)，NCIH292細(xì)胞1x10^6cells

98%25g100g小連翹次，角茴香107471cyclooxygenase2

 糖-明膠培養(yǎng)基/Lactose-Gelatin Medium產(chǎn)氣莢膜梭菌明膠液化試驗(yàn)250克國產(chǎn)/進(jìn)口

AstragalosideⅢ

Alpha1MG(Human Alpha1microglobulin) ELISA Kit  人α1微球蛋白CAS號：112629 腐胺檢測試盒100THuman/人Elisa試盒30374017

草質(zhì)素甙5(6)羧基熒光素（混合物）5mg

5-羥基色鹽鹽,血清鹽鹽 質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR Serotonin hydrochloride(5-HT) 透質(zhì)酶(含10mL酶解緩沖液)香菇 Lentinula edodes

  優(yōu)級胎牛血清進(jìn)口、原裝25羥基膽固醇檢測試盒25gHuman/人Elisa試盒4792589

異鼠李素3OβD葡萄糖苷5(6)羧基熒光素（混合物）5mg

次野鳶尾黃素;Irisflorentin 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢 小鼠成肌細(xì)胞英文名稱：C2C12

  標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清現(xiàn)貨供應(yīng)神經(jīng)型一氧化氮合成酶檢測試盒5gHuman/人Elisa試盒4792670

5(6)羧基熒光素（混合物）5mg

重樓皂苷I；重樓皂甙I 訂購|咨詢 規(guī)格： HPLC≥98%,20mg/支 三羥基*基輔酶A合成酶2抗體 PLDN ELISA Kit 蒼白蛋白(PLDN)ELISA試劑盒

Tryptose Broth Base100腸道病71型IgG抗體檢測試盒5mg盤狀結(jié)構(gòu)域受體家族成員2檢測試盒ImmunoglobulinG
牛分枝桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒環(huán)氧續(xù)隨子; Epoxylathyr CAS號： 28649607 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

華蟾毒它靈;Cinobufotalin CAS號： 1108685 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

華蟾毒;Cinobufagin CAS號： 470371 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

槲皮素3OβD葡糖糖7O CAS號：  規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

琥珀;Butane diacid CAS號： 110156 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

胡薄荷;Menthone CAS號： 89805 規(guī)格： 0.2ml 訂購|咨詢

葫蘆巴堿;Trigonelline CAS號： 535831 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

紅花八角;Dunnianol CAS號： 139726297 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

紅松內(nèi);Pinusolide CAS號： 31685800 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

湖貝堿 ;peimine CAS號：  規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

黑芥子苷;Sinigrin CAS號： 3952985 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

黃連堿;Coptisine chlori CAS號： 3486666 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

環(huán)黃芪;Cycloastragenol CAS號： 84605185 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

葫蘆素D;Cucurbitacin D CAS號： 3877869 規(guī)格： 10mg 訂購|咨詢

葫蘆素 E ;cucurbitacin CAS號： 18444661 規(guī)格： 10mg 訂購|咨詢
熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
產(chǎn)品僅用于科研其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。