詳細介紹
實驗過程:
一、肉色諾卡菌探針法熒光定量PCR試劑盒試劑準備
1. DNA模板
2.產品僅用于科研對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
參數規格:
產品名稱:肉色諾卡菌探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱:Nocardia carnea
產品規格:50T
產品運輸:低溫運輸
產品保存:-20℃保存
產品有效期:一年
產品特點:本產品就是根據保守區設計引物而開發的高靈敏熒光定量 PCR 產品。
運輸及保存
低溫運輸,-20℃保存,保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX(根據機型決定,具體見使用方法)。
本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
?
產品及特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據鮑皰疹樣病毒探針法熒光定量保守序列設計的專一性引物,與相關病毒無交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量PCR檢測,避免后續污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應體系的熒光定量PCR。
以下是公司正在熱銷的產品:
97%500g5mg(+)異蘿芙木431038very low density lipoprotein
辛弗林 質量規格:>98%,BR Synephrine
Stevioside苯磺氨地平標準品規格:規格:人晚期糖基化終末產物受體(RAGE/AGER)CLIA試劑盒 0.2ml
CRP(Human CReactive Protein) ELISA Kit 人C反應蛋白CAS號:107415 δ氨基酰脫水酶檢測試盒500gHuman/人Elisa試盒3073050
97%25g25mg蘿芙木明91203Kininogen 1
酵母浸出粉/酵母粉/干酵母/酵母提取物/酵母浸粉/酵母浸膏粉/酵母萃取物/酵母抽提物/Yeast extract powderBR250/500克國產/進口
Gastrodin氨地平相關物質A標準品規格:規格:人5-羥色-N-酰基轉移酶(AA-NAT)CLIA試劑盒 0.2ml
ALD(Human aldosterone) ELISA Kit 人醛固CAS號:107362129 膽色素原脫氨酶檢測試盒100gHuman/人Elisa試盒307346
99%5g500g5′核苷酶(5′NT)檢測試劑盒(鉬藍比色法)Neuroglobin
革蘭氏染液(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)/Gram Stain Solution(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)細菌革蘭氏染色50毫升×4國產/進口
Leupeptin 亮抑酶肽進口、原裝趨化子3檢測試盒1gHuman/人Elisa試盒490642
97%25g100g單化酶(MAO)檢測試劑盒(醛腙比色法)Heparin Binding Epidermal Growth Factor Like Growth Factor
正壬(分析標準品,≥99.8%(GC)) 質量規格:分析標準品,≥99.8%(GC) Nonane
GRP( Gastrin Releasing Peptide ) 促胃泌素釋放肽(抗原)現貨供應趨化子4檢測試盒25gHuman/人Elisa試盒490642
97%1g5g單化酶(MAO)檢測試劑盒(醛腙比色法)Glycoprotein 95
氫化卵脂(大豆)/大豆氫化卵脂/氫化大豆卵脂/HSPCBR,PC=95%1公斤國產/進口
Egg yolk powderBR同工酶檢測試盒20mgS腺苷硫氨檢測試盒Tolllikereceptor2
肉色諾卡菌探針法熒光定量PCR試劑盒*泊苷 CAS號: 33419420 規格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
鹽羅格列 CAS號: 302543620 規格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
鹽格列 CAS號: 112529154 規格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
異香蘭素 CAS號: 621590 規格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
異 CAS號: 124765 規格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
鹽拓撲替康 CAS號: 119413546 規格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
異去蟛蜞菊內 CAS號: 6468559 規格: HPLC≥98%;5mg 訂購|咨詢
亞麻 CAS號: 1191419 規格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
新西蘭牡荊苷 CAS號: 23666139 規格: HPLC≥98%;10mg 訂購|咨詢
纈草醛 CAS號: 67910070 規格: HPLC≥98%;10mg 訂購|咨詢
關附素 CAS號: 1394485 規格: HPLC≥98%;10mg 訂購|咨詢
旋復花內 CAS號: 33627417 規格: HPLC≥98%;10mg 訂購|咨詢
8香葉草氧補骨脂素 CAS號: 7437550 規格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
熊果 CAS號: 7372307 規格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
細辛醛 CAS號: 4460860 規格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
使用方法:
一、稀釋PCR陽性對照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的DN段作為陽性對照。
2. 標記6個離心管,分別為7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品,必須設置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)。可以用10μL上步制備的PCR陽性對照的第4號(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當于1萬拷貝)或第5號(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設置qPCR反應(20 μL體系,在樣品制備室進行)
10. 如果只做1次重復,則標記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照,6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復,則反應設置數量相應增加2或3倍。
11. 在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好。