詳細介紹
實驗過程:
一、奈瑟菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒試劑準備
1. DNA模板
2.產品僅用于科研對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
參數規格:
產品名稱:奈瑟菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱:Neisseria spp.
產品規格:50T
產品運輸:低溫運輸
產品保存:-20℃保存
產品有效期:一年
產品特點:本產品就是根據保守區設計引物而開發的高靈敏熒光定量 PCR 產品。
運輸及保存
低溫運輸,-20℃保存,保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX(根據機型決定,具體見使用方法)。
本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
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產品及特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據鮑皰疹樣病毒探針法熒光定量保守序列設計的專一性引物,與相關病毒無交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量PCR檢測,避免后續污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應體系的熒光定量PCR。
以下是公司正在熱銷的產品:
Silymarin孕和adipoQ 受體家族成員Ⅶ檢測試劑盒20mg
血小板反應蛋白(THBS1)重組蛋白英文名稱:Recombinant Thrombospondin 1 (THBS1)
轉鐵蛋白(TRF)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)重組人 CGREF1 蛋白 (His 標簽)*5mL/支×10(g)
ACTN3(Human AlphaActinin 3) ELISA Kit 人α輔肌動蛋白3CAS號:781 氨氨基轉移酶檢測試盒500gHuman/人Elisa試盒30652110
Salicin孕受體檢測試劑盒5mg
青蒿(標準品) 質量規格:HPLC≥98%,標準品 Artemisic acid
亮氨豐富α2-糖蛋白1(LRG1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)重組人 CALCB / CGPR / Calcitonin 2 蛋白 (Fc 標簽)*250(g)
hsCRP(Human high sensitivity CReactive Protein) ELISA Kit 人超敏C反應蛋白CAS號:731959 天門冬氨氨基轉移酶檢測試盒5gHuman/人Elisa試盒30674807
楊梅甙; 五羥基黃3鼠李糖苷Cy5.5N羥基琥珀酰亞5mg
標準溶液(1000μg/ml,基體:1mol/L HNO3) 質量規格:1000μg/ml,基體:1mol/L HNO3 Zinc standard 疊化物葡萄糖液態培養基 規格: 250g 用途: 用于水和污水中糞性鏈球菌發酵法的推測試驗(CJ/T148-2001和SN/T2206.5-2009)。
BetaAmyloid (3135) β淀粉樣肽3135(多肽蛋白)現貨供應細胞色素氧化酶檢測試盒500mgHuman/人Elisa試盒488108
Cy5.55mg
TAN[=1-(2-噻唑偶)-2-萘酚](>99.0%(T)) 質量規格:>99.0%(T) TAN [=1-(2-Thiazolylazo)-2-naphthol] 赭曲霉 Aspergillus ochraceus桿菌屬 Lactobacillus sp.
BetaAmyloid(128) β淀粉樣肽128(多肽蛋白)*D木糖檢測試盒100mgHuman/人Elisa試盒488175
姜黃二; 莪二Cy5N羥基琥珀酰亞 5mg
桑皮苷A 訂購|咨詢 規格: HPLC≥98%;20mg 4號染色體開放閱讀框27抗體 Col Ⅲ ELISA Kit Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)ELISA試劑盒
BetaAmyloid(140) β淀粉樣肽(140)(多肽蛋白)進口、分裝酰膽堿轉移酶檢測試盒25mgHuman/人Elisa試盒488175
奈瑟菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒槲皮素7OαL鼠李糖苷 CAS號: 22007723 規格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
槲皮素3龍膽二糖甙 CAS號: 7431836 規格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
訶子林鞣 CAS號: 18942262 規格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
海柯皂苷元 CAS號: 467550 規格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
覆盆子葡萄糖苷 CAS號: 38963949 規格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
二氯 CAS號: 2156561 規格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
兒茶精水合物 CAS號: 88191484 規格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
對羥 CAS號: 501973 規格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
短葉蘇木 CAS號: 18490954 規格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
地骨皮素 CAS號: 164991677 規格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
地骨皮素 CAS號: 75288969 規格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
燈盞花素 CAS號: 規格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
刺五加苷A CAS號: 規格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
草夾竹桃苷 CAS號: 531282 規格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
蒼術苷鹽 CAS號: 102130438 規格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
使用方法:
一、稀釋PCR陽性對照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的DN段作為陽性對照。
2. 標記6個離心管,分別為7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品,必須設置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)。可以用10μL上步制備的PCR陽性對照的第4號(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當于1萬拷貝)或第5號(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設置qPCR反應(20 μL體系,在樣品制備室進行)
10. 如果只做1次重復,則標記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照,6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復,則反應設置數量相應增加2或3倍。
11. 在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好。